原代細胞培養之血清解凍滅活等問題

原代細胞培養液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等，其中牛血清是Z常用的血清，分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清，價格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清，如廠家能做到這一點，新生小牛血清的質量與胎牛血清的質量相差不大。如小牛出生后已哺乳，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質，其質量明顯不如前兩種。

血清的質量，種類及使用的濃度都有可能影響細胞的生長，而不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細胞的生長，某些批次血清可能含有毒性或抑制細胞生長的物質。注意以下幾點：

(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃或-80℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1 個月。由于血清結冰時體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預留一定體積空間，否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。

(2)Cyagen提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發現血清有懸浮物，則可將血清加入培養液內一起過濾，切勿直接過濾血清。否則會導致營養物質的流失!

(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20 ℃或 -80 ℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發生。切勿直接將血清從-20 ℃進入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。影響使用效果!

(4)熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中須規則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement )滅活。除非必須，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多，而且還會影響血清的質量。補體參與反應有：細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大原代細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化。Cyagen提供的血清是經過嚴格處理可以直接使用，不需要特殊的處理，就能夠維持良好的支持效果。

(5)切勿將血清在37℃放置太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量。

(6)血清中的沉淀物

絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質量?？捎秒x心3000rpm, 5 分鐘去除，也可不用處理。顯微鏡下“小黑點”：經過熱處理過的血清，沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點”，常誤認為血清受污染。一般情況下，此小黑點不會影響細胞生長。
*        維生素E油    30KU
*        乙酸維生素E    2KU
進口/國產    保存：-20℃    5-核黃素磷酸鈉鹽    1KU
*        5-核黃素磷酸鈉鹽二水物    17.5KU
*    2～8℃，避光    維生素B3    1KU
*        異煙酸    2KU
進口/國產    保存：-20℃    維生素B5    100U
*    2～8℃    維生素B6    1KU
*        鹽酸吡哆醛    2KU
*        鹽酸吡哆胺    500U
進口/國產        蕓香葉苷    500U
*    2～8℃    丙烯酰胺    1KU
*    保存：-20℃    丙烯酰胺&甲叉雙丙烯酰胺干粉    1KU
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