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    細胞培養之消化實驗

    時間:2018-4-23閱讀:107
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    許多同學對細胞培養消化做了許多研究,得出了很多有價值的經驗,也見到很多人的困惑。其實細胞培養,尤其是細胞系的培養,就消化而言,不是太難,做得多了,善于總結經驗,就能把細胞越養越好。一般的程序步驟,細節操作,我這里就不講了,只講一些基本操作背后的知識,如果不對之處,歡迎指正,一起討論:
    1、其實絕大部分細胞消化的時候是只要用*潤洗一遍即可,吸去*后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量*在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用*孵育細胞,連續這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,*潤洗吸去,然后37度消化。
    2、什么算是消化好了呢?不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了,細胞之間的附著也已經消失了,細胞已經獨立分布了(雖然沒有呈現很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是*成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性,無論死活的細胞都是如此,你可以嘗試,準備的單個細胞懸液,貼壁后觀察細胞,仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養細胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液。
    細胞培養細胞只要能從基質上脫離下來,這個時候即使是成片的(比如Calu-3細胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規模聚集(10個細胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間,或者象有的同學那樣吹打1h,等待單細胞懸液出現。
    100194-200502    含量測定    100mg    *
    100195-199701    含量測定    50mg    *
    100196-200803    GC法含量測定    1000mg    鄰位甲酚
    100197-201002    檢查用    50mg    *
    100198-201004    UV法含量測定    100mg    *
    100199-201002    含量測定    100mg    *
    100200-200202    含量測定    50mg    青*
    100201--201003    含量測定    100mg    氫溴酸右*
    100203-200503    UV法含量測定    100mg    *
    100204-200702    含量測定    100mg    *
    細胞培養

     

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