細胞凋亡檢測在生物化學(xué)上的應(yīng)用

在生物化學(xué)上，多數(shù)細胞凋亡檢測的過程中，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶活化，活性增加。核DNA隨機地在核小體的連接部位被酶切斷，降解為180-200bp或它的整倍數(shù)的各種片斷。如果對核DNA進行瓊脂糖電泳，可顯示以180-200bp為基數(shù)的DNA ladder（梯狀帶紋）的特征。
許多同學(xué)對細胞消化做了許多研究，得出了很多有價值的經(jīng)驗，也見到很多人的困惑。其實細胞培養(yǎng)，尤其是細胞系的培養(yǎng)，就消化而言，不是太難，做得多了，善于總結(jié)經(jīng)驗，就能把細胞越養(yǎng)越好。一般的程序步驟，細節(jié)操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識，如果不對之處，歡迎指正，一起討論：
1、其實絕大部分細胞消化的時候是只要用*潤洗一遍即可，吸去*后，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量*在37度一般不到2min足夠消化細胞（絕大部分1min不到）。對于這些細胞原則上不要用*孵育細胞，連續(xù)這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，*潤洗吸去，然后37度消化。
2、什么算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細胞已經(jīng)獨立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個時候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養(yǎng)的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，無論死活的細胞都是如此，你可以嘗試，準備的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液
細胞膜是一選擇性的生物膜，一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜。當細胞壞死時，質(zhì)膜不完整，PI就進入細胞內(nèi)部，它可嵌入到DNA或RNA中，使壞死細胞著色，細胞凋亡檢測和活細胞不著色。而一些活細胞染料由于為親脂性物質(zhì)，可跨膜進入活細胞，因而可進行活細胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱，它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結(jié)合（主要結(jié)合于A-T）堿基區(qū)），顯示凋亡細胞和活細胞。凡是看到有凋亡小體的細胞都是凋亡細胞。
100031-200304    含量測定    100mg    *
100032-        50mg    *
100033-200607    含量測定    100mg    *
010034－200503    含量測定     100mg     枸櫞酸氯米芬
        50mg    甲磺酸雙氫麥角毒堿
100037-200306    含量測定    50mg    *
100038-200803    檢查用    100mg    鄰甲苯磺酰胺
100039-200602    檢查用    100mg    6-巰基嘌呤
100042-200002    檢查用    50mg    2-氯-4-硝基苯胺
100043-199701    檢查用    50mg    *
        50mg    馬來酸*
細胞凋亡檢測