細胞培養染色體標本形態

細胞培養用于遺傳學分析常見的是體外培養的細胞株，多為惡性腫瘤細胞株，且呈貼壁生長，僅小數細胞株為懸浮生長。培養細胞有來源易得、細胞分裂率高和染色體標本制出清晰度高等優點。組織細胞培養基染色體制備的關鍵是掌握好體外細胞的生長動態，只有處在對數生*的細胞才能出現較高的分裂相，所以積水仙素處理的時機及量是染色體標本形態及分裂指數的關鍵。
1、實驗材料
培養基液（PRMI 1640、M199、DMEM等），小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素，刻度離心管，直吸管及彎頭吸管，培養瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片。
2、培養液配制
培養液85-95%
小牛血清5-15%
雙抗（選擇）100u/ml
3、操作過程
（1）培養基細胞：選擇處于指數生*、用大瓶培養的80-90%匯合單層培養細胞；
（2）終止培養：當有大量圓形發亮細胞出現時，加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培養混合液，置溫箱繼續培養6-10小時以抑制分裂期細胞停止于分裂中期；
（3）聚集細胞：
（A）搖動法：
可利用分裂中期細胞培養基變圓與底物附著不牢特點，此時可持培養瓶，左右反復橫向水平搖動，可使90%的中期分裂細胞從瓶壁脫落；
（B）消化法：
將培養液倒入離心管內，給培養瓶內加0.025%*液0.5-1ml/瓶，水平左右搖動，便培養瓶底壁面*接觸消化酶，稍后用彎頭吸管吹打，待細胞*脫落后，加入3-5ml前培養終止消化。用吸管移入裝有培養基液的離心管內2000rpm10分鐘。棄上清液，留沉淀細胞；
（4）低滲處理：給沉淀細胞加頂溫的37℃0.075MKCL8ml左右，用吸管打均勻，在溫箱中靜置20-30分鐘；
（5）預固定：向低滲處理適當的離心管中加新鮮配制的3∶2甲醇，冰乙醇固定液1-2ml，用吸管輕松吹打調勻，此措施能起到使細胞表面輕微固定，可防止固定后細胞培養基粘連成塊。
（6）細胞培養固定：800-1000rpm10分鐘，棄上清液加新鮮配制的3∶2甲醇冰乙酸固定液10ml，加入時要沿管壁慢慢加入，后輕輕吹打，封口后室溫靜置30分鐘以上，反復三次；
（7）制片：末次離心后，倒掉上清液，留沉淀細胞，加新鮮配制固定液0.5ml左右，混勻后*制片，其它同外周血方法。
中藥對照藥材    卷柏(墊狀卷柏）    2.0g.    中藥對照藥材
中藥對照藥材    麥芽    10.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    花椒    2.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    蘆根    1.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    扶芳藤    10.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    伸筋草    1.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    雞冠花    2.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    苦楝皮    2.0g    中藥對照藥材
細胞培養