固定透化處理原代細胞進行成像優劣勢

固定透化處理原代細胞進行成像優劣勢
優勢：細胞狀態保留在某個時間節點，細胞變得通透可允許大分子進入，可以保護并穩定總的細胞結構，靶標不會移動，更易于成像
劣勢：由于固定處理，蛋白構造可能發生變化；大多數酶都已失活；細胞內的可溶性成分可能會丟失；動態過程可以提供更多的功能信息
固定
固定就是保持抗原細胞和亞細胞結構固定不動，同時又能使抗體進入到細胞和亞細胞的所有部位。

固定時可使用一些交聯試劑，如多聚甲醛，有利于保護細胞結構。其通過與毗鄰的蛋白質等大分子化學結合到一起，起到固定作用，這一過程被稱為交聯，但是可能會降低一些細胞成分的抗原性，因為交聯阻礙了抗體結合。鑒于此，可采用抗原修復技術，尤其是固定孵育時間較長時或使用高百分比的交聯度固定劑時。
另外一種選擇就是使用有機溶劑如乙醇、甲醇、丙酮，但是它們會吸去脂類使細胞脫水，同時會使蛋白沉淀在細胞架上。其中甲醇、丙酮既具有固定作用，也可以通透。但是有些抗原表位對甲醇特別敏感，能破壞其抗原表位的結構，所以如果檢測原代細胞內的蛋白，需要通透處理，此時可以選擇丙酮替代。由于乙醇沒有通透作用，對于膜表面的抗原，此時可以選擇冷乙醇固定處理。
通透
通透步驟將會去除細胞膜脂質體，從而允許抗體等較大的分子進入到原代細胞內部，檢測細胞內抗原必須經過此處理。

0.1–0.5%（體積比，溶解在PBS內）的Triton® X-100和NP-40為常用的透化洗滌劑。透化時間10-15min是較好的起始點，但如果這種處理不太適合您的靶標，則可能需要嘗試縮短時間或使用其他洗滌劑。此類除垢劑還可以透過細胞核膜，因此適于各種靶標位置。
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD304/Neuropilin-1  神經纖毛蛋白-1抗體     0.1ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD31(PECAM-1)/HRP  辣根過氧化物酶標記血小板內皮細胞黏附分子-1抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD31(PECAM-1)/HRP  辣根過氧化物酶標記血小板內皮細胞黏附分子-1抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD31(PECAM-1)/PE  熒光素PE標記血小板內皮細胞黏附分子-1抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD31(PECAM-1)/PE  熒光素PE標記血小板內皮細胞黏附分子-1抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD31/FITC  熒光素標記血小板內皮細胞黏附分子-1抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD31/FITC  熒光素標記血小板內皮細胞黏附分子-1抗體IgG     0.2ml
規格：    Multi-class antibodies    Anti-CD31/FITC  熒光素標記血小板內皮細胞黏附分子-1抗體IgG     0.2ml原代細胞