原代細(xì)胞的提取操作過程

原代細(xì)胞的提取的整個操作過程：
1. 整個操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進(jìn)行，所有的器件要高壓消毒。
2. 依據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不只能夠消毒，也能夠讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時分不會沾到剪刀或安排上。
3. 用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器刺進(jìn)心尖，同時在右心耳處剪開一個小口，緩慢推進(jìn)注射器，隨著心臟的跳動，將體內(nèi)的血液沖洗出來。
4. 取出小鼠的肺部安排，將肺安排切成小米粒樣的巨細(xì)，置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾回。
5. 將小米粒巨細(xì)的肺安排置于培育瓶中（培育瓶前一天用1%明膠溶液包被培育面，4度過夜，小鼠處理前，將培育瓶放置培育箱中，使其溫度恢復(fù)至37度），置于培育箱37度的環(huán)境下，消化4個小時。
6. 消化4小時后，參加RPMI1640培育基（有10%血清、1%雙抗、1%內(nèi)皮細(xì)胞成長因子）10ml（*增加培育基，能夠是正常培育時的2倍量），持續(xù)培育24小時（持續(xù)培育的時刻可依據(jù)細(xì)胞貼壁狀況適當(dāng)調(diào)整）。
7. 24小時后，取出肺安排，鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，換液。
8. 原代細(xì)胞的提取和培育是很慢的過程，一般需比及24小時后，才能在鏡下看到些許細(xì)胞群，一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的擺放狀況。
9. 原代細(xì)胞2-3天換液一次，由于內(nèi)皮細(xì)胞成長形成單層時，會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以，內(nèi)皮細(xì)胞成長挨近單層時就能夠傳代了，不要比及長得非常滿。