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    ELISA實驗擴增產(chǎn)物在凝膠中異常分述

    時間:2023/9/18閱讀:299
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    ELISA實驗擴增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散異常分述:
    1、酶量過高。減少酶量;酶的質(zhì)量差,調(diào)換另一來源的酶。
    2、dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度。
    3、MgCl2濃度過高。可適當降低其用量。
    4、模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應<50ng,而基因組DNA則應<200ng。
    5、引物濃度不夠優(yōu)化。對引物進行梯度稀釋重復PCR反應。
    6、循環(huán)次數(shù)過多;增加模板量減少循環(huán)次數(shù)至30,縮短退火時間及延伸時間,或改用二種溫度的PCR循環(huán)。
    7、退火溫度過低。
    8、電泳體系有問題:
    ①凝膠中緩沖液和電泳緩沖液濃度相差太大;
    ②凝膠沒有凝固好;
    ③瓊脂糖質(zhì)量差。
    9、若為PCR試劑盒則可能:
    ①由于運輸儲存不當引起試劑盒失效;
    ②試劑盒本身質(zhì)量有問題,如引物選擇、循環(huán)參數(shù)等選擇不當。
    10、降解的陳舊模板擴增也易產(chǎn)生涂布。

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