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細胞衰老檢測方法與步驟:
1、細胞接種前在6孔培養板中預先放置滅菌的細胞片，每孔加入1×10E5個細胞，37℃ 5% CO2條件下培養過夜，使細胞在細胞片上生長。
2、在超凈工作臺中吸棄6孔培養板中的培養液，加入×1 PBS，洗滌細胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。
3、吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1 PBS，洗滌細胞3次，每次3分鐘。
4、吸棄×1 PBS，加X-Gal溶液以浸沒細胞片為宜，37℃孵育4~8小時或過夜，用保鮮膜包被6孔培養板以防染液蒸發。
5、取出細胞爬片，去離子水沖洗2次，再次用固定液固定4分鐘，流水輕輕沖洗。
6、將細胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I（2分鐘）→95%酒精Ⅱ（2分鐘）→100%酒精I（2分鐘）→100%酒精I（5分鐘）→二甲苯I（2分鐘）→二甲苯Ⅱ（2分鐘）。
7、中性樹膠封片。
8、在普通光學顯微鏡下觀察衰老細胞形態。
每張片子鏡下計數400個細胞，確定X-Gal染色陽性細胞（衰老細胞）在細胞群體中的所占的百分比即衰老細胞率（藍染細胞數/總計細胞數×100%）。
細胞衰老檢測注意事項:
1、X-Gal溶液需要現用現配。
2、細胞固定時間過長或固定之后清洗不干凈，均會影響后續的酶反應。
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