小規(guī)模制備噬菌體上清

[方法]
1．用巴氏吸管從單個(gè)噬菌斑中挑取噬菌體，并轉(zhuǎn)移到裝有200ul噬菌體緩沖液的微量管中。
2．70℃加熱20分鐘，再離心30分鐘以除去噬菌體上清液中的細(xì)菌。
3．用稀釋的含噬菌體的上清，感染X11-BlueTB細(xì)胞。噬菌體上清可于4℃保存。
4．無攪動(dòng)孵育15分鐘，然后在37℃下劇烈振蕩孵育30分鐘。
5．鋪在LD-瓊脂培養(yǎng)基+Amp/G1u平板上，37℃孵育過夜。
6．在2m1 LB+Amp培養(yǎng)液中接種單個(gè)菌落，并在37℃下劇烈振蕩孵育（>350r/min），直到細(xì)胞密度達(dá)到OD600＝0．25。
7．37℃下極溫和攪動(dòng)孵育15分鐘。
8．用輔助噬菌體M13K07（moi＝30）超感染，并加IPTG（終濃度為0．1mmol/L），溫和混合10分鐘，而后37℃下劇烈振蕩孵育5小時(shí)。
9。將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到微量管中，以大速度離心30分鐘除去細(xì)菌；并在4℃保存噬菌體上清。其滴度一般高于1×1010TU/m1。