用噬菌體上清和人血清進行ELISA

[方法]
1．將200ul濃度為1ug/ml的抗pⅢmAb 57D1①包被緩沖液，分別加在多孔板各個板孔 中。4℃孵育過夜。
2．棄去包被液，并用PBST洗滌數次。
3．每孔加250ul封閉液，37℃孵育60分鐘。包被板可立即使用或在一20℃保存數周。
4．每孔加100ul封閉液和100ul如上述制備的清亮噬菌體上清。在37℃下孵育60分鐘以 使噬菌體顆粒結合。
5．將人血清在200ul封閉液中，室溫預孵育30分鐘；其中包含2．5ul細菌提取物、大約 5 × 1010pfuPEG—濃縮f1Rl—11．1噬菌體以及10ul來自無關大鼠雜交瘤細胞上清。當 檢測單個克隆時，采用1：100比例稀釋血清； 當檢測噬菌體文庫時，采用1：400比 例稀釋血清。此步可以減少針對野生型噬菌體的血清抗體、細菌污染物及大鼠抗pⅢ單 抗的干擾。
6．從包被板中棄去噬茵體上清，并用PBST充分洗滌板孔。
7．在每孔中加200ul預孵育的血清混合物，在室溫下孵育2小時。
8．除去血清混合物，用PBST充分洗滌板孔。在每孔中加入200ul堿性磷酸酶標記二抗， 室溫孵育60分鐘。
9．除去二抗溶液，并用PBST充分洗滌。用底物緩沖液快速洗滌板孔。
10．在每孔中加200ul顯色液，37℃暗處孵育15—60分鐘。
11．用自動酶標儀將A405和A655間的差值作為結果記錄。