氯化鈣法進行質體的轉形

方法步驟：
1） 進行轉形實驗前16~20 h，自 -70℃取出貯存的菌種，以劃單一菌落方式將菌株JM109 接種在SOB固體培養基上，在37℃培養。
2） 取40 mL SOB培養基裝入125 mL已滅過菌的三角瓶 （請記得加入Mg2+）。 另取1 mL SOB加于微量離心管中。 由SOB固體培養基上選4~6 個約2~3 mm大小的單一菌落接入1 mL SOB中，震蕩將菌體打散后，加入40 mL SOB中，于37℃震蕩培養約2~3 h，直至細胞數約為4~7×107/mL。 可于接菌2 h后每隔20~30 min測A600估計
3） 收集菌液于離心管中，置冰浴中10~15 min。
4） 以750~1,000 g 離心12~15 min （4℃）。
5） 倒去上清，并盡量將液體倒干，或以微量移液器頭吸干凈。
6） 沉淀加入1/3 菌液體積冰冷的0.1 M CaCl2，稍加震蕩，混合均勻，置冰浴中10~15 min。
7） 同上4）, 5） 的操作。再重復6）, 4）, 5） 的操作，以使反應更*，增加成功率。
8） 加入1/25 菌液體積冰冷的0.1 M CaCl2，稍加震蕩使混合均勻。
◆ Competent cells 制備完成！
9） DNA 樣品 （<10 μL） 先裝于微量離心管中，置冰浴中預冷，另取一微量離心管，標上 #0，不加入任何DNA （作為negative control），亦置冰浴中預冷。
每個樣品加入200 μL 菌液，震蕩混合后，置冰浴中20~40 min。
10） 42℃加熱90 s （溫度及時間均需很準確，請事先檢查水浴鍋的溫度，不可超過42℃）。
◆ Heat shock！
11） 置冰浴中2 min。
12） 加入800 μL SOC，混合后，于37℃震蕩培養30~60 min。
13） 將各管轉形液上下搖動混合均勻后。#5 取20 μL 至另一離心管中，加入180μL SOC （稀釋10 倍），混合均勻后，涂布于SOC/Amp plate。 #0, #1~#4 各取200 μL 涂抹在SOC/Amp plate。 剩余菌液以6,000 rpm 離心1 min，倒去上清，沉淀加入200 μL SOC，均勻打散后涂抹在另一個SOC/Amp plate 上。
14） 待培養基表面的菌液*被吸收后，倒置培養皿于37℃培養16~20 h 后，觀察各個plate 上菌落的形狀并計算菌落數。