ELISA實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵的洗滌參數(shù)和建議

ELISA實(shí)驗(yàn)中的洗滌參數(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。以下是關(guān)鍵的洗滌參數(shù)和建議：

1. 洗滌量：

    建議使用350µl洗滌液進(jìn)行洗滌，以確保整個(gè)反應(yīng)孔壁得到清潔。洗滌量越高，殘留的抗體或抗原量越少，但過(guò)多可能會(huì)導(dǎo)致液體溢出。

    如果之前遇到過(guò)高背景，可以將洗滌量調(diào)高，最好是比包被體積更高，以減少背景。

2. 洗滌次數(shù)：

1) 常規(guī)做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。包被平板需要的洗滌次數(shù)可能比用戶包被的平板少，因此需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)優(yōu)化洗滌次數(shù)。

2) 增加洗滌次數(shù)可以降低背景，但太多次洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度，影響測(cè)定。

3. 控制洗滌量和次數(shù)的替代方法：

    可以加入過(guò)量的洗滌液，如96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 µl，但有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液，比如1 ml。通過(guò)在分液的同時(shí)打開(kāi)吸液功能，實(shí)現(xiàn)增加洗滌量而不溢出。

4. 抽吸參數(shù)：

    吸液高度和吸入位置可以調(diào)整，以降低背景（殘留量）和差異。<cite>1</cite>

5. 洗板機(jī)使用注意事項(xiàng)：

1) 使用洗板機(jī)時(shí)應(yīng)注意洗滌參數(shù)，包括洗滌量和洗滌次數(shù)，確保條件恒定。

2) 洗滌參數(shù)的調(diào)整應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

通過(guò)合理設(shè)置和優(yōu)化這些洗滌參數(shù)，可以有效減少背景信號(hào)，提高ELISA實(shí)驗(yàn)的特異性和靈敏度。