聚合酶鏈式反應（PCR）三個基本循環(huán)步驟

PCR（聚合酶鏈式反應）是一種用于在體外擴增特定DNA片段的分子生物學技術。其基本原理是通過模擬生物體內DNA的復制過程，利用高溫變性、低溫退火和中溫延伸三個步驟的循環(huán)來實現DNA的指數級擴增。

以下是PCR反應的詳細原理：

一、PCR反應的:

1. 變性（Denaturation）：

    溫度：9398℃

    過程：在這個步驟中，雙鏈DNA在高溫下發(fā)生解旋，形成單鏈DNA。這是因為雙鏈DNA中的氫鍵在高溫下斷裂，導致兩條互補鏈分離。

    作用：變性步驟使得DNA模板成為單鏈，為后續(xù)的引物結合提供了條件。

2. 退火（Annealing）：

    溫度：5065℃，通常比引物的Tm值低35℃

    過程：隨著溫度的降低，引物與單鏈DNA模板結合。引物是預先設計的短DNA序列，與目標DNA片段的兩端互補。

    作用：引物與模板DNA的特異性結合是PCR擴增的關鍵，確保了擴增的特異性。

3. 延伸（Extension）：

    溫度：72℃（Taq酶的最佳活性溫度）

    過程：在這一階段，耐熱DNA聚合酶（如Taq酶）催化DNA的合成。以引物為起點，聚合酶沿著模板鏈合成新的DNA鏈，形成與模板互補的DNA鏈。

    作用：延伸步驟使得DNA模板引物結合物被復制，形成新的雙鏈DNA分子。

上述三個步驟（變性退火延伸）構成一個循環(huán)，每個循環(huán)后，新生成的雙鏈DNA分子可以作為下一個循環(huán)的模板。通過重復這些循環(huán)，目標DNA片段得以指數級擴增。每個循環(huán)理論上可以使目標DNA的數量翻倍，經過2530個循環(huán)后，目標DNA的拷貝數可以達到10^6到10^9倍。