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    • NADP蘋果酸酶(NADPME)微量法檢測試劑盒

    NADP蘋果酸酶(NADPME)微量法檢測試劑盒

    參考價
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    具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
    • 型號
    • 品牌其他品牌
    • 所在地上海市
    • 更新時間2022-04-24
    • 廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
    • 入駐年限10
    • 實(shí)名認(rèn)證已認(rèn)證
    • 產(chǎn)品數(shù)量10000
    • 人氣值319021
    產(chǎn)品標(biāo)簽

    NADP蘋果酸酶NADPME微量法

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    貨號GOY-01S6357
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    NADP蘋果酸酶(NADPME)微量法檢測試劑盒 產(chǎn)品詳情

    商品介紹

    測定意義

    ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)NADP-ME(EC1.1.1.40)

    測定原理:

    NADP-ME催化NADP+還原成NADPH,在340nm下測定NADPH增加速率。

    需自備的儀器和用品:

    紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

    試劑的組成和配制:

    提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

    試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。

    【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明!

    產(chǎn)品名稱

    規(guī)格

    檢測方法

    貨號

    NADP蘋果酸酶(NADPME)微量法檢測試劑盒

    100管/96樣

    微量法

    GOY-01S6357


    QQ截圖20220307153443.png

    所需的儀器和用品:

    可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

    四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

    建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

    樣本和試劑浪費(fèi)!

    1、樣本制備

    ① 組織樣本:

    取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

    勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

    【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取

    ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

    先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

    提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

    12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

    【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

    4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

    注意事項(xiàng):

    1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

    2、對照管只需要做一管。

    3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。

    4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;

    2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

    若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般

    將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通常可以使測定正常。

    測定步驟:

    1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。

    2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

    3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

    4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。

    5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

    選擇抗凝的注意點(diǎn):

    ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

    ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

    ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

    ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

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