操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
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產品名稱 | |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X97036 |
商品屬性：
名稱 小鼠支氣管成纖維細胞 2.組織來源：支氣管組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 小鼠支氣管成纖維細胞分離自支氣管組織；支氣管（Bronchi），是指由氣管分出的各級分枝，由氣管分出的一級支氣管，即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細長，走向傾斜；后者較粗短，走向較前者略直，所以經氣管墮入的異物多進入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區別就是，氣管是以“C”型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的支氣管成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。支氣管成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持組織的正常形態，合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。 5.方法簡介： ()實驗室分離的小鼠支氣管成纖維細胞采用膠原酶-聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的小鼠支氣管成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M008 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25% 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
重組人 BMP-2 蛋白 (Fc 標簽)
重組食蟹猴 RANKL / OPGL / TNFSF11 蛋白 (Fc 標簽)
重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白
重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)
重組人 Fas Ligand / FASLG / CD95L 蛋白 (His 標簽)
重組食蟹猴 OX-40L / TNFSF4 蛋白 (Fc 標簽)
重組人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽)
重組食蟹
小鼠支氣管成纖維細胞Dengue Virus(DENV)登革病毒1型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-PLC beta3 (Ser537) 磷酸化磷酯Cβ3抗體 規格: 0.1ml
Ochroconis gallopava奔馬赭霉探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CXCL10 CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗體 規格: 0.1ml
Brucella.melitensis羊布氏桿染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 1-3天Rabbit Anti-human IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗人IgG 規格: 0.1ml
狼源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TNFSF4/CD252 瘤壞死因子配體超家族成員4抗體 規格: 0.1ml
Human Polyomavirus 6 （HPyV6）人多瘤病毒6 探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周SLC27A6/ACSVL2 脂肪酸轉運蛋白6抗體 規格: 0.2ml
Phytophthora fragariae Hickman 草莓疫霉紅心病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-TIRAP(Tyr86) 磷酸化白細胞介素1受體銜接蛋白抗體 規格: 0.1ml
Radix platycodonis桔梗PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Aconitase 2/ACO2 鐵調節蛋白2抗體 0.2ml
Human Metapneumo Virus(hMPV)人偏肺病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CRX1 CRX抗體 規格: 0.1ml
Rickettsia gravesii白堊立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MAS1L G蛋白偶聯受體MAS相關蛋白抗體 規格: 0.2ml
Sanguis draxonis血竭染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Lamin B [Nuclear Envelope Marker] 核纖層蛋白B抗體(細胞核內參) 規格: 0.1ml
