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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X97420 |
商品屬性：
名稱 大鼠肝枯否細胞 2.組織來源：肝臟組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠枯否細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。枯否氏細胞(Kupffer細胞)是肝臟的肝血竇內(nèi)一些固定于竇壁的巨噬細胞，它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒，并能吞噬和清除肝血竇中的細菌、異物和衰老的紅細胞，并把血紅蛋白分解成。此外，肝巨噬細胞也有處理抗原，誘導(dǎo)T細胞增殖，參與免疫調(diào)節(jié)的作用。枯否氏細胞和一般巨噬細胞不同，枯否氏細胞不具有增加抗原免疫原性的能力，相反有消除或減弱抗原性的作用。枯否氏細胞能吞噬來自血液循環(huán)的抗原抗體復(fù)合物和其他有害物質(zhì)，以消除這些物質(zhì)對機體的損害。枯否細胞功能障礙可導(dǎo)致腸源性內(nèi)毒素血癥。電鏡下有很多皺褶和微絨毛。 5.方法簡介： ()實驗室分離的大鼠肝枯否細胞采用混合酶灌流消化、低速離心、密度梯度離心、差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： ()實驗室分離的大鼠肝枯否細胞經(jīng)CD68免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R132 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形、巨噬細胞 傳代特性屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群 消化液（12mM） 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人多聚腺苷二核糖聚合(PARP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒進口、組裝
小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
山羊脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒*直銷
人胃蛋白原C(PG-C)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人粒細胞集落刺激因子(CSF3)抗體免疫試劑盒進口、組裝
人谷脫羧65(GAD65)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人α乳清蛋白(α-La)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
犬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)免疫試劑盒進口、分裝
雞γ干擾素(IFN-γ)免疫試劑盒進口、組裝
大鼠肝枯否細胞Rhizoma paridis重樓探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周INCA1 INCA1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlADAMTS4 整合素樣金屬蛋白與凝4型抗體 0.1ml
Turkey Astrovirus(TAstV)火雞星狀病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CCDC125 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體 規(guī)格: 0.2mlWnt8b WNT蛋白家族Wnt8b抗體 規(guī)格: 0.2ml
Staphylococcus aureus探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Acetyl-Histone H4(K16) 乙酰化組蛋白H4(K16)抗體 0.1mlPhospho-ATP1A1(Ser23) 磷酸化鈉鉀ATP蛋白a1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cortex lycii地骨皮探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周CNOT8 細胞表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-horse IgM 兔抗馬IgM 規(guī)格: 1mg
Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus(ISKNV )傳染性脾腎壞死病病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PAK7/PAK5/MBT 激活激PAK7抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-PLC gamma 2(Tyr753) 磷酸化磷酯Cγ2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Babesia equi馬巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TIMM17A 線粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)位抗體 規(guī)格: 0.2mlCLDND2 膜蛋白CLDND2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Bovine Immunodeficiency Virus(BIV)牛免疫缺損病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周H1N1 Hemagglutinin 1/HA probe 甲型毒凝素抗體 規(guī)格: 0.2ml
Semen phaseoli赤小豆探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Claudin 11/OSP(Oligodendrocyte Marker) 少突膠質(zhì)細胞跨膜蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Streptomyces spp.鏈霉通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Lin28 RNA結(jié)合蛋白LIN28抗體 規(guī)格: 0.2ml
Giardia lamblia藍氏賈第鞭毛蟲A型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CK3 細胞角蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
