T25m2 小鼠支氣管成纖維細胞說明

小鼠支氣管成纖維細胞【Mouse Airway: Normal Bronchial Fibroblasts】 產品描述：提供的原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩定。在生物技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
發貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基；2、說明書及注意事項；3、售后服務標準。
保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h，再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。

收到凍存細胞的處理方法：
1.37°C水浴預熱培養基；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續暖細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。

實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
SiRNA完整表達文庫構建技術試劑盒5 洛莫司汀（標準品）  Lomustine  質量規格：HPLC>98%,標準品

Skin reactive factor / inflammatory factor (SRF/IF) ELISA Kit 人皮膚反應因子/炎性因子(SRF/IF)ELISA試劑盒 羥基脲  Hydroxyurea/Hydroxycarbamide  質量規格：>99%,BR

SOCS20 羥基脲（標準品）  Hydroxyurea/Hydroxycarbamide  質量規格：HPLC>98%,標準品

Sophorajaponicaagglinin,SJA槐凝集素(SJA)ELISA試劑盒規格：96T/48T 枸櫞酸托瑞米芬  Toremifene   質量規格：>99%,BR,可用于細胞培養

Sophorajaponicaagglinin,SJAELISA試劑盒槐凝集素(SJA)ELISA試劑盒規格：96T/48T 枸櫞酸托瑞米芬  Toremifene   質量規格：>99%,BR,可用于細胞培養

Soybeanagglinin,SBA大豆凝集素(SBA)ELISA試劑盒規格：96T/48T 枸櫞酸托瑞米芬（標準品）  Toremifene   質量規格：HPLC>98%,標準品

Soybeanagglinin,SBAELISA試劑盒大豆凝集素(SBA)ELISA試劑盒規格：96T/48T 異環磷酰胺  Ifosfamide  質量規格：>99%,USP,BR,可用于細胞培養

SULFORHODAMINE蛋白標記試劑盒 異環磷酰胺（標準品）  Ifosfamide  質量規格：HPLC>98%,標準品

Susa固著液50毫升 鹽酸普拉克索  Pramipexole 2HCL monohydrate  質量規格：>99%,EP6.8

swinemajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/SLAⅠ豬主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/SLAⅠ)ELISA試劑盒規格：96T/48T 鹽酸普拉克索（標準品）  Pramipexole 2HCL monohydrate  質量規格：HPLC>98%,標準品
MouseHaptoglobin,Hpt/HPELISA試劑盒小鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒規格：96T/48T 草酸依地普侖/草酸艾司西酞普蘭  Escitalopram Oxalate  質量規格：≥98.5%,BR

小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 草酸依地普侖/草酸艾司西酞普蘭（標準品）  Escitalopram Oxalate  質量規格：HPLC>98%,標準品

Rat leinizing hormone releasing hormone (LHRH) ELISA Kit 大鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒 消旋卡多曲  Racecadotril  質量規格：>99.5%，EP6.2

HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21AELISAKit 人細胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 消旋卡多曲（標準品）  Racecadotril  質量規格：HPLC>98%,標準品

cit瓜氨酸規格：96T/48T 乙酰螺旋霉素  Acetylspiramycin  質量規格：>1200u/mg,CP2005

載玻片細胞鈣ATP酶PMCA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 尼羅替尼  Nilotinib  質量規格：>98.5%,BR

Mouseeosinophilcationicprotein,ECPELISAKit小鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒規格：96T/48T 尼羅替尼（標準品）  Nilotinib  質量規格：HPLC>98%,標準品

小鼠酶Ⅸ(CA9)ELISA試劑盒 ，英文名： CA9 ELISA Kit 螺旋霉素  Spiramycin  質量規格：>3900IU/MG,EP,BR,可用于細胞培養

豚鼠白介素6(IL-6)ELISA檢測試劑盒guineapigIerleukin6,IL-6ELISAKit 96T/48T 螺旋霉素(標準品)  Spiramycin  質量規格：含量測定,標準品

牛0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)試劑盒 Bovine phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit 螺內酯  Spironolactone  質量規格：>99%,USP 32,BR,可用于細胞培養
小鼠支氣管成纖維細胞說明SAGE基因表達文庫構建技術服務1個文庫 羥基匹格列酮（M-Ⅱ）（非對映）  Hydroxy Pioglitazone (M-II) (Mixture of Diastereomers)  質量規格：美國進口

SAGE基因表達文庫構建技術試劑盒5 羥基攀援山橙堿 HPLC≥98% 20mg

Salmoncalcitonin,SCTELISAKit鮭魚降鈣素(SCT)ELISA試劑盒規格：96T/48T 羥基檸檬酸 HPLC≥98% 20mg

Salmoncalcitonin,SCTELISA試劑盒鮭魚降鈣素(SCT)ELISA試劑盒規格：96T/48T 羥基脲-15N  Hydroxyurea-15N  質量規格：美國進口

Schenk&Hildebrandt基礎培養基500毫升溶液/片劑 羥基脲（標準品）  Hydroxyurea/Hydroxycarbamide  質量規格：HPLC>98%,標準品

Schenk&Hildebrandt*培養基500毫升溶液/片劑 羥基脲  Hydroxyurea/Hydroxycarbamide  質量規格：>99%,BR

SDS蛋白酶DNA萃取試劑盒50 羥基萘酚藍  Hydroxynaphthol blue  質量規格：金屬滴定指示劑

SELDI蛋白質譜分析技術試劑盒5 羥基彌羅松酚 HPLC≥95% 20mg

SheepComplemefragme3brccptor,C3bRELISAKit綿羊補體片段3b受體(C3bR)ELISA試劑盒規格：96T/48T 羥基馬兜鈴酸A HPLC≥93% 10mg

SheepComplemefragme3brccptor,C3bRELISA試劑盒綿羊補體片段3b受體(C3bR)ELISA試劑盒規格：96T/48T 羥基馬鞭草苷 HPLC≥98% 10mg
注意事項：
1.接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色
，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。