產(chǎn)品名稱：Ishikawa(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)*
英文名稱：Ishikawa(human endometrial carcinoma cell line)
規(guī)格：5×105cells/瓶
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-X0838
Ishikawa(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)*的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
收到后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉?/a>。
Ishikawa(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)*培養(yǎng)操作流程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號(hào)21127-022），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1，細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
MHC- III /H-2 III (Mouse major histocompatibility complex- III ) ELISA Kit 小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類 96T
B7-2/sCD86(Human soluble Cluster of differeiation 86) ELISA Kit 人可溶性CD86 96T
E-Cad(Mouse E-Cadherin) ELISA Kit 小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白 96T
IL-27(human Ierleukin 27) ELISA Kit 人白介素27 96T
TPO-Ab ELISA Kit 大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體 96T
IL-28(human Ierleukin 28) ELISA Kit 人白介素28 96T
IL-29(human Ierleukin 29) ELISA Kit 人白介素29 96T
CD30(Mouse Cluster of differeiation 30) ELISA Kit 小鼠CD30分子 96T
IL-23(Human Ierleukin 23) ELISA Kit 人白介素23 96T
AIF ELISA Kit 大鼠凋亡誘導(dǎo)因子 96T
dsDNA ELISA Kit 大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體 96T
MHC- II /H-2 II (Mouse major histocompatibility complex- II ) ELISA Kit 小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類 96T
MIF(Human Macrophage Migration Inhibitory Factor) ELISA Kit 人巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子 96T
TFPIHuman Tissue factor pathway inhibitor ELISA Kit 人組織因子途徑抑制物 96T
sEPCR(Mouse soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體 96T
ALP ELISA Kit 大鼠堿性磷酸酶 96T
ADAMTS13/vWF-cp ELISA Kit 大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶 96T
MECF(ouse eosinophil chemotactic factor) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子 96T
IP-10/CXCL10(Human ierferon-inducible protein 10) ELISA Kit 人干擾素誘導(dǎo)蛋白10 96T
Ishikawa(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞)*IL-1(Human Ierleukin 1) ELISA Kit 人白介素1 96T
ANG-4 ELISA Kit 大鼠血管生成素4 96T
Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白 96T
IL-17(Human Ierleukin 17) ELISA Kit 人白介素17 96T
E-Selectin/CD62E(Mouse E-Selectin) ELISA kit 小鼠E選擇素 96T
