重編程的細胞凋亡檢測分析

通過轉錄因子的強制性表達，可使體細胞凋亡檢測重編程為多能狀態，這是一個動態的過程。一個體細胞如何成功地進行這一轉變，對此我們知之甚少，因為低效率、較長的潛伏時間和非同步進程會阻礙分子分析。隨時間推移描述大量細胞群的特征，讓我們對整個重編程細胞群的進程有了深刻認識，但經歷這個過程的大多數細胞不能重編程，對該過程的整體分析，必然偏向非生產性重編程事件的測量。
為了解決這些問題，研究團隊試圖識別和表征生產性重編程細胞群。轉基因化學計量的早期作用是從誘導多能干細胞（iPSCs）的轉基因整合位點推斷出的，通過依據轉基因表達水平分選纖維母細胞。Sox2low、Oct4high、Klf4high，被認為是一個組合，經過表達不同轉基因化學計量的多順反子構件得以進一步驗證。單細胞延時成像技術分析顯示一種早期的增殖表型。早期的工作揭示了重編程狀態的進程，連續獲得了多能性標志物堿性磷酸酶、SSEA1、Nanog和Oct4。此外，研究人員觀察到，成纖維細胞標記Thy1的抑制和逆轉錄病毒表達的缺失，發生在這個過程的早期。這些狀態的表征顯示，兩次重編程與c-Myc、Klf4介導的*次及Oct4、Sox2、Klf4介導的第二次同時出現。
穩定的部分重編程細胞系，已被分離并得以表征。這些部分重編程的細胞在該過程中出現較晚，但是在獲得多能性之前，可能來自于多個重編程細胞群，包括成纖維細胞、神經干細胞和B細胞。形態上它們類似于iPSCs，但沒有獲得多能性，因為它們不能形成畸胎瘤并依賴重編程轉基因。雖然這些細胞的大部分在標準條件下沒有獲得多能性，但是通過5-氮雜胞苷和*或過表達Nanog，可以把它們推向多能狀態，從而表明它們類似一個中間狀態，在這個狀態中有障礙抑制了多能性的獲得。
雖然豐富中間體的表征一直是有用的，但分析仍然高度依賴批量細胞群，因為大細胞群的異質性仍然是普遍的。近，有研究人員試圖通過單細胞mRNA分析，鑒定重編程的早期隨機階段，隨后是與SOX2表達對應的晚期確定性階段，來解決這一問題。盡管這項研究的結果很重要，但是其結論可能因在每個時間點測定的樣本數相對較小所限制（96個細胞），此外還因為較低的重編程效率，只有2%的細胞可以成功地重新編程。為此，在這項新的研究中，斯坦福研究小組通過單細胞質譜流式細胞技術（一種流式細胞儀技術，采用稀土金屬同位素標記抗體和檢測）來表征重編程過程。細胞凋亡檢測技術產生的結果，與傳統的熒光流式細胞術基本相同，但可讓我們每秒鐘在大約500個細胞中同時測量40多種不同的參數。使用質譜流式細胞技術，該研究小組在重編程的*個3到4周，分析了三個不同的重編程細胞系。對質譜流式細胞技術數據集進行的時間分辨、高維進展分析，可促進連續的重編程分子圖譜的構建。本研究所描述的這種方法和數據集，為重編程優化和其他細胞重編程機制研究、以及隨時間動態變化的復雜細胞群研究，提供了寶貴的資源。
兔子可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
兔主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
兔子高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
兔子B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
細胞凋亡檢測