?生物制藥微課堂|第二期-宿主細(xì)胞殘留蛋白如何分析？5分鐘了解前沿

                                                                 關(guān)注我們，更多干貨和驚喜好禮

本期放送

上一場微課堂，為您詳解了：單克隆抗體肽圖分析的挑戰(zhàn)及方案，本期，讓我們來談?wù)勆镏扑幹欣@不開的難點(diǎn)話題：宿主細(xì)胞殘留蛋白分析。

什么是微課堂：

為了更好地服務(wù)中國生物制藥企業(yè)接軌前沿法規(guī)與趨勢，賽默飛開啟名為: Leaders in BioPharmaceutical Characterization and Control的系列微課堂，為您帶來前沿的生物藥表征與質(zhì)控的*實(shí)踐，一探生物藥“創(chuàng)新”與“質(zhì)量”的世界前沿。”

Host Cell Proteins: Analyzing Impurity in Biopharmaceuticals

講師介紹

Amy Claydon博士是賽默飛生物制藥客戶解決方案中心高級應(yīng)用科學(xué)家。在此之前，Amy擔(dān)任克勞福德科學(xué)公司（Crawford Scientific）的技術(shù)顧問，為來自眾多行業(yè)的分析人員開設(shè)了色譜和質(zhì)譜多方面的課程。在獲得博士學(xué)位之后，艾米還在利物浦大學(xué)（University of Liverpool）擔(dān)任了近5年的博士后研究員，主要方向?yàn)槭褂梅€(wěn)定同位素標(biāo)記和Orbitrap技術(shù)應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)動態(tài)變化研究。

5min速覽版：

為了方便您快速掌握微課堂咨詢與要點(diǎn)信息，我們特地總結(jié)了5min速覽版。當(dāng)然，如果您想深入了解課程精髓，不錯過原汁原味的專家分享，推薦您一定要觀看完整版微課堂。

看點(diǎn):宿主細(xì)胞殘留蛋白分析的難點(diǎn)及解決方案

通過工程細(xì)胞重組技術(shù)生產(chǎn)的生物制品，在宿主細(xì)胞表達(dá)目標(biāo)蛋白的同時，宿主細(xì)胞本身的蛋白質(zhì)也會部分表達(dá)，產(chǎn)生相關(guān)雜質(zhì)。殘留的宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)(HCP)可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)不可預(yù)測的免疫反應(yīng)，因此需要通過工藝純化使得終產(chǎn)品中的HCP的殘留量盡可能低（<100ppm），并建立良好的方法來檢測HCP。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是目前HCP檢測的常見方法，然而開發(fā)特定工藝的ELISA試劑非常耗時（六個月以上）且開發(fā)成本昂貴，并只能測定HCP總量，而不能對每種蛋白進(jìn)行鑒定和定量。其次，通用的ELISA試劑盒的專屬性差，無法*覆蓋樣品中全部HCP種類。LC/MS由于高分辨高靈敏度等優(yōu)異性能，可對生物制品中的HCP進(jìn)行全面鑒定和定量分析（定量下限可達(dá)1ppm以內(nèi)，動態(tài)范圍5-6個數(shù)量級）。對于生物制藥而言，使用更加先進(jìn)準(zhǔn)確的分析方法，獲得更加準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)是至關(guān)重要的，更有助于通過申報與審批。

難點(diǎn)

LC/MS分析HCP主要的難點(diǎn)在于結(jié)果的重現(xiàn)性和可靠性，要求高效液相及高分辨質(zhì)譜本身具有的良好的重現(xiàn)性，在數(shù)據(jù)分析上也要進(jìn)行嚴(yán)格篩選，三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中至少兩次鑒定到該蛋白，且unique peptide≥2。此次報告中提出了一套完整的HCP分析方法流程：使用Lilly禮來^[1]的非變性蛋白酶解方法，將抗體和雜蛋白分離(smart digest試劑盒及KingFisher能夠嚴(yán)格控溫、且前處理高效)；高效液相色譜（使用常規(guī)液相即可得到理想的結(jié)果）及質(zhì)譜的高度重現(xiàn)性使鑒定結(jié)果更加準(zhǔn)確，Proteome Discoverer嚴(yán)格的數(shù)據(jù)篩選及Biopharma Finder深度表征分析，可定量<1ppm的蛋白，且重現(xiàn)性良好。

賽默飛HCP鑒定和定量方案

（點(diǎn)擊查看大圖）

液相重現(xiàn)性良好：8針VS18針進(jìn)樣

（點(diǎn)擊查看大圖）

如果使用Orbitrap高分辨質(zhì)譜平臺Exploris 480，能夠?qū)崿F(xiàn)鑒定靈敏度及動態(tài)范圍的進(jìn)一步提高。那么如何進(jìn)行合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)？質(zhì)譜方法的參數(shù)設(shè)置？鑒定結(jié)果可做到什么程度？這些問題都會在此次報告中給出答案，精彩不要錯過！

NIST mAb MS2 data acquired from exploris 480

（點(diǎn)擊查看大圖）

掃碼了解完整講座

相關(guān)閱讀

• 蓄能2020藥典：生物制品標(biāo)準(zhǔn)接軌，5分鐘了解世界生物藥前沿

• 蓄能|2020藥典系列 對標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)中藥農(nóng)殘有毒有害物質(zhì)控制標(biāo)準(zhǔn)

• 蓄能|2020版藥典系列-當(dāng)新版藥典遇上基因毒性雜質(zhì)

• 【預(yù)告】|2020藥典系列線上講座：快來pick 5月的精彩

• 蓄能，迎接*“嚴(yán)”藥典

參考文獻(xiàn)：

1. A Novel Sample Preparation for Shotgun Proteomics Characterization of HCPs in Antibodies. Anal Chem. 2017 May 16;89(10):5436-5444.

如需合作轉(zhuǎn)載本文，請文末留言。

掃描下方二維碼即可獲取賽默飛全行業(yè)解決方案，或關(guān)注“賽默飛色譜與質(zhì)譜中國”公眾號，了解更多資訊+