一年，四季，二十四節(jié)氣，

隱藏著大自然的規(guī)律。

寒氣凜冽，飛雪彌天。

12月7日，遇見“大雪”

大雪，

農(nóng)歷二十四節(jié)氣中的第21個(gè)節(jié)氣，

更是冬季的第三個(gè)節(jié)氣，

標(biāo)志著仲冬時(shí)節(jié)的正式開始。

大家還記得自己在冬季的食材嗎？

一杯暖暖的星爸爸？

這是戒不掉的“拿鐵因子”

一鍋色香味俱全的豬肚雞火鍋？

這是滿滿的“膠原蛋白”

那么，食材決定你的卡路里，

富有濃濃膠原蛋白氨基酸，

充滿活力的他們幾乎要跳出頁面了！

今天飛飛為大家呈上氨基酸測(cè)定的全面解決方案，讓我們一起在“大雪”這個(gè)節(jié)氣里，探索生命之源，揭開氨基酸的神秘面紗。

 什么是氨基酸？

氨基酸是生物體中重要的生命物質(zhì)，是組成酶和蛋白質(zhì)的基本單元。作為小分子，氨基酸對(duì)生物大分子的活性及其生理功能起著極為重要的作用。氨基酸分析在生物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、食品科學(xué)和環(huán)境化學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，對(duì)于氨基酸的檢測(cè)一直是分析化學(xué)的一個(gè)熱點(diǎn)。

氨基酸的分析方法比較繁多，主要體現(xiàn)在儀器、衍生劑和檢測(cè)器種類多，這無疑給科研工作者的選擇帶來了困難。

不要擔(dān)心，飛飛來幫你！

氨基酸常用分析方法

目前常用的方法主要有氨基酸衍生儀、離子色譜法和液相色譜法。液相作為一個(gè)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器，在氨基酸檢測(cè)方面具有廣泛的用戶基礎(chǔ)。大多數(shù)氨基酸不具有發(fā)色團(tuán)，紫外吸收較弱，用紫外檢測(cè)需要進(jìn)行衍生后再測(cè)定 ，目前常見的衍生方法有OPA-FMOC柱前衍生、AQC柱前衍生，茚三酮柱后衍生等；另外采用電霧式檢測(cè)器（CAD）可以不經(jīng)過衍生直接測(cè)定氨基酸，簡(jiǎn)化了測(cè)定步驟、節(jié)約了測(cè)定時(shí)間。接下來小編就給大家把這些好用的方法一一道來。

OPA-FMOC柱前衍生方案

首先是OPA-FMOC柱前衍生方案，鄰苯二甲醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）衍生化方法具有樣品制備簡(jiǎn)單、反應(yīng)迅速、可自動(dòng)化在線衍生等優(yōu)點(diǎn)，衍生反應(yīng)可以在常溫下快速完成，OPA衍生一級(jí)氨基酸，F(xiàn)MOC衍生二級(jí)氨基酸。該方法采用兩個(gè)波長(zhǎng)測(cè)定，338nm測(cè)定一級(jí)氨基酸衍生產(chǎn)物，263nm測(cè)定二級(jí)氨基酸（脯氨酸）衍生產(chǎn)物。

賽默飛U3000液相具有強(qiáng)大的用戶自定義進(jìn)樣程序（UDP，user defined program）功能，可以實(shí)現(xiàn)在線稀釋、在線衍生和大體積多次進(jìn)樣等，只需在進(jìn)樣器模式（Inject Mode）中，選擇“UserProg”，即進(jìn)入自定義進(jìn)樣程序（UDP）編輯界面，選擇所需要的命令即可以輕松實(shí)現(xiàn)OPA-FMOC在線自動(dòng)化衍生。結(jié)合Accucore C18色譜柱可以地將17種常見氨基酸進(jìn)行分離。圖1為OPA-FMOC柱前衍生方法譜圖。

圖1  OPA-FMOC在線衍生測(cè)定17種氨基酸譜圖

AQC柱前衍生方案

其次是采用6-氨基喹啉-N-羥基琥珀酰亞氨基氨基甲酸酯（AQC）柱前衍生，該衍生方法具有靈敏度高、衍生產(chǎn)物穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，但不能用于在線自動(dòng)衍生，需要衍生完成后再上機(jī)測(cè)定，因?yàn)樵撗苌磻?yīng)需要在高溫下進(jìn)行一定時(shí)間才能完成。

賽默飛Acclaim RSLC C18色譜柱快速分析17種氨基酸的譜圖，采用U3000 RSLC快速液相在12分鐘內(nèi)就可以結(jié)束分析。圖2為AQC柱前衍生方法譜圖。

圖2  AQC衍生快速測(cè)定17種氨基酸譜圖

不需衍生、直接測(cè)定的方案

后隆重登場(chǎng)的是我們目前受歡迎的通用型檢測(cè)器電霧式檢測(cè)器帶來的不需衍生、直接測(cè)定的方案，電霧式檢測(cè)器作為新型原理、高靈敏度的通用型質(zhì)量檢測(cè)器，可以測(cè)定半揮發(fā)和難揮發(fā)性物質(zhì)。與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）相比，CAD具有更高的檢測(cè)靈敏度、更好的重復(fù)性和更寬的動(dòng)態(tài)響應(yīng)范圍，近年來相繼有脫氧膽酸、釓布醇等品種的CAD檢測(cè)方法被USP和EP所收錄。圖3為采用該檢測(cè)器和HyperCarb 石墨化碳色譜柱分析19種氨基酸的譜圖。

圖3 無需衍生電霧式檢測(cè)器直接測(cè)定19種氨基酸譜圖

飛飛總結(jié)語

三種方法各有千秋，既可以滿足常規(guī)氨基酸檢測(cè)需求，也都具有良好的重復(fù)性。就穩(wěn)定性而言，不衍生直接用CAD測(cè)定的方法無疑穩(wěn)定性較好，另外兩種采用衍生的方法，OPA-FMOC衍生方法可以在線自動(dòng)衍生測(cè)定，樣品處理好后上機(jī)即可無人值守完成衍生測(cè)定，較AQC方法可以省去手動(dòng)衍生處理的步驟和時(shí)間。

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