芹菜源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 返回列表頁

芹菜源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，產(chǎn)品僅用于科研請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
相對定量簡介：
分析方法： ①雙標(biāo)曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡介
公式：
優(yōu)點(diǎn)：分析簡單，實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡單
缺點(diǎn)：對每一個基因，每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線；必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線；這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用：基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對定量方法之一

樣品要求及注意事項(xiàng)：
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮，請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑，并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ，也可以將樣品研磨后放在 Trigol中，動植物組織 ： 50～100mg/mlTrigol，貼壁細(xì)胞：10cm2/mlTrigol，懸浮細(xì)胞：5×106動植物，酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進(jìn)行評估。
4、 實(shí)時熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

FMOC-D-色，  規(guī)格100g　進(jìn)口/原裝

FMOC-D-色，  規(guī)格25g　進(jìn)口/原裝

FMOC-D-色，  規(guī)格5g　進(jìn)口/原裝

FMOC-D-纈，  規(guī)格100g　進(jìn)口/原裝

FMOC-D-纈，  規(guī)格25g　進(jìn)口/原裝

FMOC-D-纈，  規(guī)格5g　進(jìn)口/原裝

N-甲酰-L-纈酰酰-L-精對硝基鹽鹽，  規(guī)格5mg　進(jìn)口/原裝

D-纈酰-L-白酰-L-賴對硝基，  規(guī)格25mg　進(jìn)口/原裝

D-纈酰-L-白酰-L-賴對硝基，  規(guī)格5mg　進(jìn)口/原裝

Z-酰-L-脯酰-L-精酰對硝基醋鹽，  規(guī)格25mg　進(jìn)口/原裝

Z-酰-L-脯酰-L-精酰對硝基醋鹽，  規(guī)格5mg　進(jìn)口/原裝

L-天門冬鈣，  規(guī)格100g　進(jìn)口/原裝

L-天門冬鈣，  規(guī)格25g　進(jìn)口/原裝

L-天門冬鈣，  規(guī)格500g　進(jìn)口/原裝

L-谷-5-甲酯，  規(guī)格100g　進(jìn)口/原裝

DH5α鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：10 X 200微升

DH5α電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：10 X 100微升

DH10B細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：1毫升

DH10B鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：5 X 200微升

DH10B電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：5 X 100微升

  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：100微升

GMS10細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：1毫升

GMS10甲基化基因鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：10 X 100微升

GMS10甲基化基因電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：5 X100微升

BJ5183細(xì)菌  進(jìn)口/國產(chǎn)  規(guī)格：1毫升
芹菜源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒Salmonella│glostrup資源名稱格羅斯出浦沙門氏菌提供形式:凍干物雞NF-κB ELISA試劑盒

Salmonella│budapest資源名稱布達(dá)佩斯沙門氏菌提供形式:凍干物雞TCA ELISA試劑盒

Salmonella│ballerup資源名稱巴勒盧浦沙門氏菌提供形式:凍干物雞PTH ELISA試劑盒

Salmonella│manhattan資源名稱曼哈頓沙門氏菌提供形式:凍干物雞IgY ELISA試劑盒

Salmonella│humber資源名稱恒比爾沙門氏菌提供形式:凍干物雞PPP ELISA試劑盒

Salmonella│artis資源名稱阿爾蒂斯沙門氏菌提供形式:凍干物雞LPS ELISA試劑盒

Salmonella│locarno資源名稱洛加諾沙門氏菌提供形式:凍干物雞IFN-β/IFNB ELISA試劑盒