ATCC細胞轉化操作流程

1、 ATCC細胞在冰上預冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圓底離心管。1支用來轉化樣品，1支做pUC18對照。同時將NZY+ broth培養基在42°C預熱。
2、 冰上融化感受態細胞。融化時輕輕將細胞混勻并分裝成100ul/管。
3、 每管中加入隨試劑盒提供的4 ml b-ME（巰基乙醇）。
4、 溫和轉動試管，將細胞在冰上放置10分鐘，每2分鐘溫和轉動一下。
5、 每管細胞加入0.1–50 ng樣品DNA （或2 ml連接反應物）（參見DNA 質量與體積說明。）用滅菌dH2O水按1:10稀釋對照pUC18 DNA，并取1 ml稀釋的pUC18 DNA加入轉化細胞。
6、 溫和轉動試管，并在冰上放置30分鐘。
7、 試管在42°C水浴熱激30秒。熱激時間對轉化效率極度重要。
8、 試管冰浴2 分鐘。
9、 每管加入0.9 ml 預熱 （42°C） 的NZY+ 肉湯，37°C、225–250 rpm 搖床培養1 小時。
10、 取 200 ml轉化混和物鋪帶有相應篩選抗生素的LB瓊脂糖平板（如果進行顏色篩選還需加入IPTG和X-gal）。pUC18陽性對照則取5 ml 鋪氨芐青霉素LB瓊脂糖平板。
注意：細胞經 1000 rpm離心 10分鐘會聚集，應將細胞沉淀用 200 *l NZY+ 肉湯重懸。如果用于鋪板的細胞 <100 ml，先將細胞加入200 ml培養基中，然后用滅菌涂布棒鋪板。如果采用?100 ml細胞則可以直接鋪板。傾斜涂布棒并輕輕拍打，盡量減少涂布棒上的細胞殘留。
11、 37°C培養過夜。顏色篩選請參見以下Blue-White Color Screening的操作指南。
12、 pUC18陽性對照預計有約250個克?。?5 × 109 cfu/mg pUC18 DNA）。而ATCC細胞樣品DNA的轉化效率隨DNA的量和組成（超螺旋或連接產物）有較大差異，大質粒和非超螺旋DNA往往得到較少的克隆。
中藥對照藥材    鶴虱    2.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    蟾酥    0.2g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    松葉    10.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    人參蘆頭    0.5g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    廣藿香    1.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    山麥冬    1.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    山藥    2.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    山楂（山里紅）    3.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    天冬    1.0g    中藥對照藥材
中藥對照藥材    毛冬青    1.5g    中藥對照藥材
ATCC細胞