分享原代細胞侵襲實驗

原代細胞實驗簡介
腫瘤細胞侵襲能力檢測在腫瘤學（遷移、侵襲）和免疫學（遷移、趨化）中是常規實驗。
1.侵襲是細胞遷移的一種。細胞遷移分三種類型：趨觸、趨化和侵襲。
2.腫瘤細胞的侵襲性是腫瘤相關信號通路、藥物治療、靶向治療、致癌/抑癌基因等腫瘤學研究的一個重要指標。
3.免疫細胞具有趨化性，例如粒細胞、巨噬細胞、單核細胞對CCL、CXCL類因子的趨化性，免疫細胞異常（如過度趨化）通常會引起一些炎癥類疾病如風濕、關節炎、牛皮蘚、動脈粥樣化等。
具體操作
以配合24孔板的8μM PET膜Millicell 懸掛式細胞培養小室（cat#MCEP24H48）為例，實驗周期：3-5天
1.復蘇代數靠前的腫瘤細胞，在含有10% FBS的培養基 中預先培養2-3代，待細胞匯合達到80%左右，饑餓處 理18-24小時。
2.準備鋪膠：
a) 4 °C溶EMC膠過夜。
b) 將細胞小室、培養板和槍頭等于4°C 預冷。
c)用無血清的冷培養基稀釋ECM膠至20ug/mL，以5-10ug/cm2的密度加入到細胞小室的上層（按照ECM產品說明書的推薦比例和體積），輕輕搖晃使膠均勻鋪在膜上。以上操作在冰上進行。
d)立即將鋪好ECM膠的細胞小室置于培養板中，于37℃孵育1小時，ECM膠可由液體凝成固體，吸走多余的或者未凝的膠。
3.細胞用PBS清洗一次，EDTA或者0.05%胰酶消化，然后用包含5% BSA的無血清培養基中和，1500rpm離心5-10min。
4.用無血清培養基重懸細胞，調整細胞密度至0.5-2.0 x106cell/ml。
5.取上述200μL細胞液加入小室，下室（培養板）加入900L含有10% FBS的培養基。不同規格的小室和培養板所加的體積不同，具體參考Millicell R 產品說明書以配合24孔板的8μM PET膜Millicell 懸掛式細胞培養小室（cat#MCEP24H48）為例，實驗周期：3-5天
6. 37 ℃孵育24至72小時，依據腫瘤細胞類型而定。
7.孵育結束，小心取出細胞小室，吸掉小室上層培 養液，PBS清洗一遍，70%酒精或者4%多聚甲醛固 定5min，0.5%結晶紫（2%乙醇或PBS溶解）染色 20min，然后進行第8步或者第9步。
8. PBS清洗兩次以去除多余的染料，立即用棉簽擦 去濾膜上層的細胞，自然靜置風干。顯微鏡下觀察 濾膜下層的細胞，隨機選取不同的視野計數并算平均值。
9. 原代細胞結晶紫溶解濾膜下層細胞，然后用33%醋酸脫色， 將結晶紫*洗脫下來，洗脫液可在酶標儀上570 nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細。
150541-0210    320ng/支    免疫測定用
150542-0004    800ng/661IU/支    免疫測定用
150543-0004    150ng/支    免疫測定用
150544-200702    0.5ml/支    免疫測定用
150550-0004    50ng/支    免疫測定用
150551-0004    1000ng/支    免疫測定用
150552-0004    23ng/支    免疫測定用
150553-9911    21ng/支    免疫測定用
150554-9604    19ng/支    免疫測定用
150555-9003    22.8IU/支    免疫測定用
150556-200601    4000IU/支    免疫測定用
 原代細胞