人視網膜神經膠質瘤細胞運輸和保存

人視網膜神經膠質瘤細胞介紹
WERI-Rb-I細胞株是1974年R.M. McFall 和 T.W. Sery建立的兩株人眼癌細胞系中的一株。 細胞能在Difco Bacto-Agar中存活但不形成克隆。 掃描電鏡顯示在表面囊泡，板狀偽足和微絨毛在數量上和頻率上的改變。 細胞分化研究，腫瘤治療的動物模型和生化評價都涉及這株細胞。
細胞特性
1） 來源：視網膜
2） 形態：圓形細胞聚集成葡萄狀，懸浮生長
3） 含量：>1x106 
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包

運輸和保存

1.使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。

2.收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

3.收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們。 

細胞用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3） 將T25瓶中的細胞培養基離心后，去上清，添加6ml*培養基，加入新的T25瓶中繼續培養。
4) 如果細胞長滿80%請及時進行細胞傳代.                    
細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備RPMI-1640培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養，補加培養基至6ml。

2） 人視網膜神經膠質瘤細胞細胞傳代：如果細胞密度達80%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法

1. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新皿中或者瓶中，補加培養基至6ml，放入培養箱繼續培養。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例；

1，細胞凍存時，取上清，可使用血球計數板計數。
2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項：

1.收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。

2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。

3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4.人視網膜神經膠質瘤細胞所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。