人正常組織細胞培養過程常見問題

1.為什么培養的人正常組織細胞要及時傳代？
    答：體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些？其解決辦法是什么？
    答：通常細胞生長得非常快時，pH值通常下降得很快。此時可以及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外，培養瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統緩沖能力不夠、培養液中鹽濃度不正確、細菌、酵母或真菌污染等也能導致pH值通常下降得很快。
       (1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。
       (2)改用不依賴CO2培養液。
       (3)松開瓶蓋1/4 圈。加HEPES 緩沖液至10 到25mM終濃度。
       (4)在CO2 培養環境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配制的培養液。
       (5)如果是污染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌。
3.培養液pH對細胞生長的影響？
    答：由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時，需要注意一點：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
4.購買之細胞冷凍管經解凍后，為何會發生細胞數目太少之情形？
    答：研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。但對于DMSO敏感的細胞，還是復蘇細胞時，用離心去除DMSO比較好。
5.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？
    答：研究人員在細胞培養時出現存活率不佳，原因比較復雜，常見原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質不佳；血清使用錯誤或血清的品質不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置于–80 ℃太久等。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進行人正常組織細胞復蘇、凍存等工作。
1,4-α-D-葡聚糖麥芽水解酶    進口、國產    英文名稱:    β-Amylase    含量:    BR，4000u/g
粘膠質酶    進口、國產    英文名稱:    Pectinase    含量:    生物技術級，30u/mg
果膠酶Y-23    進口、國產    英文名稱:    Pectolyase Y-23    含量:    生物技術級，17u/mg
菠蘿酶    進口、國產    英文名稱:    Bromelaine    含量:    BR，50u/mg
番木瓜酶    進口、國產    英文名稱:    Papain    含量:    BR，500u/mg
酸性蛋白酶    進口、國產    英文名稱:    Acidic Protease    含量:    生物技術級，1u/mg
人正常組織細胞