ATCC細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)

 ATCC細(xì)胞的熱滅活在免疫分析時(shí)可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往*的操作步驟，并沒有確鑿的證據(jù)說明這樣做是有益的。相反，對(duì)大部分細(xì)胞而言，GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因?yàn)榧訜峥赡苁寡逯械某恋碓黾樱鼓`以為污染。

如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生?
1. 解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。并隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
2. 請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
3. 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
4. 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

培養(yǎng)基的使用

細(xì)胞培養(yǎng)基的儲(chǔ)存條件是2-8攝氏度。如果ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基不小心被凍，您應(yīng)該融化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，可能只能丟棄這些培養(yǎng)基。

★貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時(shí)，碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘，來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。

★當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí)，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會(huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對(duì)于細(xì)胞達(dá)到毒性水平。

★一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

細(xì)胞培養(yǎng)添加劑

大部分添加物和試劑Z多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會(huì)在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會(huì)影響它的性能。

★貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液只能使用一周。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會(huì)變得不穩(wěn)定。

細(xì)胞復(fù)蘇

在訂購的細(xì)胞到達(dá)后，應(yīng)立即復(fù)蘇，如果培養(yǎng)基還沒有準(zhǔn)備好，可將其放入液氮中，盡快復(fù)蘇。千萬不能放置在-20或-80℃的冰箱內(nèi)。

★細(xì)胞復(fù)蘇往往是比較容易出問題的步驟。請(qǐng)?jiān)谟嗁?strong>ATCC細(xì)胞時(shí)就向供應(yīng)商索取詳細(xì)的復(fù)蘇步驟，并仔細(xì)閱讀。有些供應(yīng)商就不推薦在復(fù)蘇時(shí)離心，對(duì)此類細(xì)節(jié)，應(yīng)特別留意。