小鼠神經干細胞培養操作方法

復蘇： 
1，將小鼠神經干細胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。 ,
2，將凍存管內細胞懸液轉移至含3-4 ml小鼠神經干細胞*培養液的15 ml離心管內，以1000 rpm，離心5 min。 
3，離心后將上清液吸除，另加入新鮮的小鼠神經干細胞*培養液2 ml，吹打懸浮。 
4，輕輕吹打，制成單細胞懸液，盡量避免氣泡。 
5，按照小鼠神經干細胞說明書中建議復蘇培養體系轉移至一個T25培養瓶中培養，加入培養液6 ml。 
6，放入37℃培養箱內培養。 
復蘇第二天觀察，如死細胞較多，更換新鮮的小鼠神經干細胞*培養液，可以使細胞生長的更好。 
傳代： 
1，待細胞長到80%滿時進行傳代，一般2-3天，具體視細胞生長情況。
2，吸除廢液。 
3，用PBS（不含鈣鎂離子）輕輕沖洗一遍。
4，加入1-2 ml的0.05%胰酶（含EDTA）至培養瓶，輕輕晃動，使胰酶覆蓋底面，置于37℃培養箱內消化細胞。 
5，在顯微鏡下觀察，直至細胞層全部脫落（一般需要5-15 min）。
6，加2 ml小鼠神經干細胞*培養液終止消化。 
7，1000 rpm離心5 min，去上清，加入小鼠神經干細胞*培養液2 ml。 
8，多次輕輕吹打細胞，制成單細胞懸液。 
9，按照1:4-1:10的比例進行傳代。 
10，放入37℃培養箱內培養。 
凍存： 
1，按傳代的方法將細胞消化下來，制成細胞懸液。
2，以1000 rpm，離心5 min，棄上清，逐滴加入已經預冷的凍存液，懸浮細胞。 
3，按每支凍存管內加入500 ml細胞懸液分裝到凍存管內，標記細胞名稱、代數、凍存日期等基本信息。 ,4，將凍存管置于程序降溫盒內，-80℃過夜，轉入液氮。 
凍存液配方： 
小鼠神經干細胞*培養液 90%，DMSO 10%