酶免疫（ELISA）技術的發展

酶免疫技術的發展

酶免疫測定具有高度敏感性、特異性，而且它的試劑比較穩定，操作簡單且無放射性危害，特別是商品試劑盒和自動化儀器的應用，使其成為一種適用于各級檢驗部門的免疫標記技術。隨著檢驗醫學的不斷發展，酶免疫測定的方法、技術也得到發展和更新，斑點-ELISA、發光酶免疫測定、免疫印跡法、BAS-酶聯免疫吸附試驗等方法不斷得到應用。

（一）斑點-ELISA

斑點-ELISA的原理與ELISA的區別在于用對蛋白質有*吸附力的硝酸纖維素膜代替塑料制品作為固相載體，酶作用底物后在硝酸纖維素膜上形成有色沉淀而使膜著色。它的靈敏度較一般ELISA高6～8倍、可達ng水平，試劑用量小，不需其它設備條件。

（二）免疫印跡法

免疫印跡法是將電泳與ELISA結合起來的一種方法。它先經十二烷基磺酸鈉-聚苯烯酰胺凝膠電泳將樣品進行分離，通過轉印將被分離的各區帶原位轉移到硝酸纖維素膜上，然后把印有蛋白質條帶的膜當成包被抗原的固相載體，做酶免疫測定。所以它的方法分為電泳、轉印、酶免疫測定三個階段。免疫印跡法結合了電泳的高分辨率和酶免疫測定的高敏感性和特異性，是一種能用于分析樣品組分的免疫學測定方法。

（三）發光酶免疫測定

發光酶免疫測定與一般EIA的區別是酶所催化的底物是發光劑。產物不是一般EIA的有色物質，而是發光產物，所發出的光可用特定的儀器測定。常用的酶是HRP和AP，HRP的發光底物有魯米諾及衍生物、對-羥基苯乙酸；AP的底物為3-（2--螺旋金剛烷）-4-甲氧基-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙烷和4-甲基傘形酮磷酸鹽。

（四）BAS-酶聯免疫吸附試驗

BAS-酶聯免疫吸附試驗是將生物素-親和素（BAS）放大系統與ELISA結合起來的一種技術。生物素（B）是一種小分子的生長因子，有兩個環狀結構，其中一個可以和親和素結合，另一個可以和包括酶、抗原（抗體）的多種物質結合。親和素（A）又稱卵白素，有4個亞基，都可與生物素穩定結合，此為放大系統的關鍵，即有1個親和素就能結合4個生物素，親和素也可被酶標記。