ELISA試劑盒批發免疫標記技術

     ELISA試劑盒批發酶標抗體或抗抗體（抗免疫球蛋白）結合物可采用戊二醛法或過碘酸鹽氧化法制備。郭春祥建立的辣根過氧化物酶（HRP）標記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行，標記效果好，特別適用于實驗室的小批量制備。現將操作方法介紹如下： 

    （一） 結合物的標記將5mg HRP溶于05ml蒸餾水中，加入新配制的006mol/L NaIO4水溶液05ml，混勻，置冰箱30min，取出加入016mol/L乙醇水溶液05ml，室溫放置30min后，加入含5mg純化抗體的水溶液（或PBS）1ml，混勻并裝透析袋，以005mol/L、pH值95碳酸鹽緩沖液緩慢攪拌透析6h（或過一夜）使之結合，然后吸出加NaBH4溶液（5mg/ml）02ml，置冰箱2h。將上述結合物混合液加入等體積飽和硫酸銨，冰箱放置30min，離心，將所得沉淀物溶于少許002mol/L、pH值74 PBS中，并對之透析過一夜。次日再離心除去不溶物，即得酶抗體結合物。用002mol/L、pH值74 PBS加至5ml，進行測定后，冷凍干燥或低溫保存。 

    （二） 結合物中HRP與抗體量的測定酶標結合物于751型分光光度計上分別用280及403nm波長測定其光密度（OD），并計算出OD403與OD280之比值以及HRP與抗體的mol/L比。

結合物中HRP濃度（mg/ml）=OD403×04 

結合物中IgG濃度（mg/ml）=（OD280-OD403×03）×062 

酶/抗體mol/L比=HRP濃度IgG濃度×4 

    （三） 結合物稀釋度的測定

用酶結合物中抗體相應的抗原直接包被聚苯乙烯反應板，采用ELISA直接法測定酶結合物效價。通常本法制備的酶結合物作1∶10 000稀釋時，其OD403仍在01以上。