原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染復(fù)合物所用的稀釋劑

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案  一般原則：建立一套適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染方案;首先從一種標(biāo)準(zhǔn)方案開始，然后通過改變?cè)噭?DNA的配比和復(fù)合物的劑量進(jìn)行優(yōu)化。 轉(zhuǎn)染復(fù)合物的制備——諸如轉(zhuǎn)染試劑/DNA配比，離子強(qiáng)度，緩沖液pH值，以及溫度等變量都會(huì)影響到轉(zhuǎn)染復(fù)合物的組成和功能。質(zhì)粒可用無菌水或TE緩沖液稀釋。如果您要使用一種市售的轉(zhuǎn)染試劑，就應(yīng)當(dāng)仔細(xì)閱讀該試劑所提供的使用說明。在不含血清或其他蛋白的培養(yǎng)基中制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物;如果制備復(fù)合物所使用的培養(yǎng)基含有血清，它就會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)染產(chǎn)生抑制。制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物的孵育時(shí)間是一個(gè)非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，對(duì)于不同的轉(zhuǎn)染試劑而言可能差別很大。  轉(zhuǎn)染試劑/DNA配比(負(fù)載比)——所有的轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)在某一個(gè)試劑/DNA配比時(shí)Z為有效。有時(shí)候這種配比的所在范圍非常狹窄;而且對(duì)于每種實(shí)驗(yàn)體系都必須進(jìn)行優(yōu)化才能得到配比。

形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物所用的稀釋劑——對(duì)于多數(shù)試劑而言，很關(guān)鍵的一點(diǎn)是要使轉(zhuǎn)染復(fù)合物能在普通基礎(chǔ)培養(yǎng)基或鹽溶液中形成。 轉(zhuǎn)染復(fù)合物的加入——有兩種替換方法可用來將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入轉(zhuǎn)染細(xì)胞：1.將復(fù)合物濃縮液逐滴加入培養(yǎng)基，或者2.將轉(zhuǎn)染復(fù)合物先用培養(yǎng)基稀釋，然后進(jìn)行培養(yǎng)基更換操作。*種方法更簡便，而第二種方法則更因?yàn)楸苊饬嗽噭┰诰植繚饩鄱a(chǎn)生毒性，所以會(huì)使結(jié)果的一致性更好。 

時(shí)間進(jìn)度  一般原則提示：要確保Z終結(jié)果的成功;建立一個(gè)合適的時(shí)間進(jìn)度進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以保證您所需要的目的蛋白能得到表達(dá)。 原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染的開始——在轉(zhuǎn)染前12小時(shí)，將細(xì)胞分種于培養(yǎng)板中。在細(xì)胞達(dá)到50-80%的融合率時(shí)開始轉(zhuǎn)染，這樣就可以使它們?cè)趯?shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)達(dá)到接近的融合。細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染復(fù)合物的攝取通常在0.5-6小時(shí)的時(shí)間內(nèi)完成。在這段時(shí)間后，就不會(huì)再發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率有所增長。養(yǎng)基更換——某些轉(zhuǎn)染試劑在攝取階段之后需要更換培養(yǎng)基。
10605-21-7         苯硫咪唑相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
        苯硫咪唑相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
    Quazepam Related Compound A    夸西泮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
        美洛昔康相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
        頭孢丙烯相關(guān)雜質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
        頭孢丙烯懸濁液標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
        左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
        左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品    30mg
99614-02-5     Ondansetron     昂丹司瓊標(biāo)準(zhǔn)品    300mg
959-24-0     Sotalol Hydrochloride     鹽酸索他洛爾標(biāo)準(zhǔn)品    300mg
92-13-7     Pilocarpine    毛果蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品    300mg
83915-83-7     Lisinopril     賴諾普利標(biāo)準(zhǔn)品    300mg
83-46-5     Beta-Sitosterol     β-谷固醇β-谷固醇標(biāo)準(zhǔn)品    300mg
原代細(xì)胞