如何選擇原代細(xì)胞培養(yǎng)的冷凍保護(hù)劑？

原代細(xì)胞冷凍保護(hù)劑是指可以保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷的物質(zhì)。冷凍保護(hù)劑常常配制成一定的溶液。一般來(lái)講，只有紅細(xì)胞、大多數(shù)微生物和極少數(shù)有核的哺乳動(dòng)物細(xì)胞懸浮在不加冷凍保護(hù)劑的水或簡(jiǎn)單的鹽溶液中，并以Z適的冷凍速率冷凍，可以獲得活的凍存物。
但對(duì)于大多數(shù)有核哺乳動(dòng)物細(xì)胞來(lái)說(shuō)，在不加冷凍保護(hù)劑的情況下，無(wú)Z適冷凍速率可言，也不能獲得活的冷凍物。例如將小鼠骨髓細(xì)胞懸浮在不加冷凍保護(hù)劑的平衡鹽溶液中，并以0.3～600℃/min 的冷凍速率降溫冷凍，98% 以上的細(xì)胞會(huì)死亡；而加入甘油冷凍保護(hù)劑進(jìn)行冷凍保存時(shí)，98% 以上的細(xì)胞都可存活。
冷凍保護(hù)劑可分為滲透性和非滲透性兩類。
01class
滲透性冷凍保護(hù)劑
滲透性冷凍保護(hù)劑可以滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是一些小分子物質(zhì)，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。其保護(hù)機(jī)制是在細(xì)胞冷凍懸液*凝固之前，滲透到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷，同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮。
甘油和DMSO并不防止細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰，在使用該類冷凍保護(hù)劑時(shí)，需要一定的時(shí)間進(jìn)行預(yù)冷，讓甘油或DMSO等成分滲透到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外達(dá)到平衡以起到充分的保護(hù)作用。
目前DMSO的應(yīng)用比甘油更為廣泛，但要注意的是，DMSO在常溫下對(duì)細(xì)胞的毒性作用較大，而在4℃時(shí)，其毒性作用大大減弱，且仍能以較快的速度滲透到細(xì)胞內(nèi)。所以，凍存時(shí)DMSO平衡多在4℃下進(jìn)行，一般需要40～60分鐘。
02class
非滲透性冷凍保護(hù)劑
非滲透性冷凍保護(hù)劑不能滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是些大分子物質(zhì)，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羥乙基淀粉等。原代細(xì)胞其保護(hù)機(jī)制的假說(shuō)很多，其中有一種可能是，聚乙烯吡咯烷酮等大分子物質(zhì)可以優(yōu)先同溶液中水分子結(jié)合，降低溶液中自由水的含量，使冰點(diǎn)降低，減少冰晶的形成；同時(shí)，由于其分子量大，使溶液中電解質(zhì)濃度降低，從而減輕溶質(zhì)損傷。
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-Bdkrb2/B2R/FITC  熒光素標(biāo)記緩激肽B2受體抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-Bdkrb2/B2R/FITC  熒光素標(biāo)記緩激肽B2受體抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-BDNF  腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體     0.1ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-BDNF/FITC  熒光素標(biāo)記BDNF蛋白抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-BDNF/FITC  熒光素標(biāo)記BDNF蛋白抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-BECN1  BECLIN-1抗體     0.1ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-BECN1/FITC  熒光素標(biāo)記一種抑癌基因抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-BECN1/FITC  熒光素標(biāo)記一種抑癌基因抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-beta Adaptin/AP2  銜接蛋白β抗體     0.2ml
原代細(xì)胞