原代細(xì)胞顯微攝影實(shí)驗(yàn)如何操作

一、原代細(xì)胞原理

微生物顯微攝影(Microphotography)是利用攝影裝置來拍攝顯微鏡視野中所觀察到的物像。在生物醫(yī)學(xué)方面，主要用于對(duì)正常細(xì)胞或病變細(xì)胞的顯微形態(tài)學(xué)研究記錄。

顯微攝影是通過顯微鏡來拍攝的方法。在動(dòng)植物檢疫工作上是科學(xué)研究、經(jīng)驗(yàn)交流、仲裁談判*的手段之一。要取得良好的顯微攝影效果，Z重要的是要有良好的顯微鏡設(shè)備和良好的顯微鏡操作技術(shù)。

一、拍攝前準(zhǔn)備

1. 光路合軸 使光軸與光束處于同一軸線上。

2. 柯勒氏照明 使觀察的視野獲礙均勻而又充分的照明；防止雜散光對(duì)照相系統(tǒng)產(chǎn)生影響；使被攝物體不受熱，影象清晰。

3. 物鏡與目鏡合理組合 依標(biāo)本的不同和顯微攝影要求，物鏡與目鏡的組合有一定規(guī)范，如：拍攝人類染色體影像，采用高分辨率的100倍油鏡，配合10倍目鏡，可獲得良好分辨的理想放大影像。

4. 調(diào)整視場(chǎng)光闌和孔徑光闌 使兩者與所用物鏡的數(shù)值孔徑（N．A．鏡口率）相等，所得的分辨力Z高；視場(chǎng)光闌一旦調(diào)好，不要再動(dòng)，而孔徑光闌可隨物鏡數(shù)值孔徑的更換，做相應(yīng)的調(diào)整。

5. 一般來說，把孔徑光闌的大小調(diào)成等于相應(yīng)該物鏡孔徑像的2/3為宜，盡管喪失了少許的分辨力，卻能提高影像的反差、焦點(diǎn)深度和清晰度。

6. 總之，上述作法是調(diào)整顯微鏡至狀態(tài)。

二、拍攝程序

1. 開啟相機(jī)后蓋，安裝膠卷于照相機(jī)內(nèi)。

2. 打開顯微鏡照明裝置的電源開關(guān)，將亮度調(diào)至適當(dāng)。

3. 依個(gè)人的視力，調(diào)整攝影目鏡調(diào)焦環(huán)至“井”字線清晰。

4. 放一片需要拍攝的標(biāo)本載玻片于載物臺(tái)上。在低倍鏡下選好要拍攝的核型或細(xì)胞結(jié)構(gòu)，再轉(zhuǎn)換到油鏡下，聚焦標(biāo)本細(xì)節(jié)，準(zhǔn)備拍照。

5. 按下曝光按鈕，曝光按鈕亮表示曝光開始進(jìn)行，熄滅表示曝光完畢。

三、黑白膠片的沖印

1. 沖印的操作步驟

（1）把膠片裝入顯影罐中（切勿粘在一起）先用清水沖洗，排除氣泡．然后再把水倒掉，這有利于顯影液的快速均一作用。

（2）從頂部罐口注入預(yù)先配好的約250 ml D-72式顯影液。20℃顯影4~12分鐘。

（3）顯影中輕輕搖影罐，使膠片表面充分受顯影液作用，顯影完畢，迅速倒出顯影液。

（4）原代細(xì)胞立即注入250 ml 預(yù)先配好的SB-I式停影液，停顯時(shí)間為10秒，倒出停影液，隨之加入250 ml 的F-5式酸性堅(jiān)膜定影液，20℃定影15分鐘。取出膠片流水沖洗30分鐘以上。

（5）將膠片掛起，用脫脂棉輕輕吸掉膠片表面過多的積水，晾干。

（6）晾干后用放大機(jī)的膠片夾子夾住膠片，藥膜面朝下，聚焦取景，然后在紅燈條件下，用壓紙板壓住所需號(hào)放大像紙，藥膜面向上。進(jìn)行曝光（適當(dāng)?shù)钠毓鈺r(shí)間要經(jīng)試驗(yàn)后決定）。

（7）曝光后的像紙，浸入D-72顯影液中，然后用竹鑷子不時(shí)地夾住像紙翻動(dòng)，直到顯影適度為止。

（8）顯影合適后立即移到SB-I式停影液中，漂洗10~20秒，再浸入定影液中處理15分鐘，取出在流水中沖洗60分鐘左右。

（9）水洗后，放在電熱上光機(jī)上烘干；裁邊，裝入有說明的紙袋內(nèi)保存。
JC-1    1mg
線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)    >100次
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原代細(xì)胞