影響人正常組織細(xì)胞因子檢測(cè)準(zhǔn)確度和特異性的因素分析

影響人正常組織細(xì)胞因子檢測(cè)準(zhǔn)確度和特異性的因素有:(1)抗體:單抗的表位識(shí)別;(2)細(xì)胞因子:多種分子形式，結(jié)合蛋白復(fù)合物、抑制劑和可溶性受體復(fù)合物;(3)血漿基質(zhì):干擾抗體，異嗜性抗體和類風(fēng)濕因子;(4)標(biāo)準(zhǔn):重組參考物質(zhì)可能不顯示與樣品平行的劑量———反應(yīng)曲線。

細(xì)胞因子結(jié)合蛋白 已知IL-1β、TNF-α和IL-6能結(jié)合從細(xì)胞進(jìn)入血漿的可溶性受體或特異的拮抗劑。免疫分析法是否能識(shí)別這樣的結(jié)合形式幾乎是未知的，但是對(duì)TNF的研究得出了一些重要結(jié)論。但使用競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析法時(shí)，癌癥病人與敗血癥病人的TNF-α是可被檢測(cè)的。而ELISA法由于不能測(cè)定TNF-α與P 55 TNF受體的結(jié)合物而無法測(cè)定癌癥病人血漿中的TNF-α。

血漿中包含幾種形式的IL-6分子，它們與一些抗血清的作用較弱，缺乏生物學(xué)活性并與其它血漿蛋白質(zhì)以及IL-6的可溶性受體組成復(fù)合物。已知IL-6免疫分析法和生物分析測(cè)定其在正常血清中的濃度為0或在10～75ng/L范圍，敗血癥病人的IL-6濃度升高到1～2μg/L，腦膜炎病人的IL-6濃度升到200μg/L。然而，May等說明大多數(shù)的檢測(cè)方法僅僅測(cè)定了低分子量的IL-6，他們采用能識(shí)別IL-6高分子量的單抗，測(cè)得在正常血清中IL-6的濃度為1～10μg/L，并且在1例骨髓移植后病人的血清樣品中，測(cè)得IL-6的濃度為5～10mg/L。

多種分子的形式 一些人正常組織細(xì)胞因子的多種分子形式已被充分認(rèn)識(shí)，但是其對(duì)細(xì)胞因子測(cè)定影響的重要性并未得到*的研究。IL-6是一個(gè)的例子，它由一個(gè)位于第7染色體上，包含5個(gè)外顯子的單一多杰基因編碼。其氨基酸序列包括幾個(gè)潛在的O-糖基位點(diǎn)，2個(gè)N-糖基位點(diǎn)和幾個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn)。由細(xì)菌產(chǎn)生的重組IL-6的相對(duì)分子量為21Kd。人成纖維細(xì)胞至少分泌6種形式，相對(duì)分子量為23～30Kd的IL-6，它們均是糖蛋白，能在敗血癥病人的血漿中被檢測(cè)。人內(nèi)皮細(xì)胞分泌一種分子量為45Kd的IL-6，它似乎是血漿中的IL-6的主要存在形式。

人血漿中的干擾物質(zhì) 血漿中通常包含有與IgG反應(yīng)的抗體。這些異嗜性的抗體可影響夾心免疫分析法，它們?cè)诜@抗體和被標(biāo)記的抗體間形成橋梁，而錯(cuò)誤地導(dǎo)致高分析值。研究表明，15%～40%的病人樣本中含有能夠干擾檢測(cè)的抗體。異嗜性抗體能與鼠、兔和牛血清免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)，在大多數(shù)情況下，它們與牛IgG的結(jié)合Z強(qiáng)。在檢測(cè)中，加入正常的非免疫動(dòng)物血清吸附異嗜性抗體，常能夠消除這種形式的干擾。

類風(fēng)濕因子是IgM的自身抗體 Hamilton等的研究說明，IgM類風(fēng)濕因子與鼠IgG的結(jié)合發(fā)生于1%的健康獻(xiàn)血者和31%的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人。然而，也有研究表明，在9.1%的正常獻(xiàn)血者中發(fā)生了這類結(jié)合。這些抗體可造成與異嗜性抗體*相同的影響，并且他們?cè)趯?duì)人正常組織細(xì)胞因子檢測(cè)具有特別意義的類風(fēng)濕病患者中的濃度*。