質(zhì)粒DNA提取實驗的實驗步驟

一、其它elisa免疫檢測試劑盒材料與試劑準(zhǔn)備 
 
1.  材料：大腸桿菌。
 
2.  儀器：超凈工作臺，培養(yǎng)箱，搖床，恒溫水浴鍋，臺式離心機，取液器一套，低溫冰箱，冷凍真空干燥機，電泳儀，水平電泳槽，紫外觀測儀。
 
3.  試劑：
 
（1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl（pH7.4），10 mM EDTA（pH8.0），50 mM葡萄糖，高壓滅菌，4℃保存。
（2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 現(xiàn)配現(xiàn)用。
（3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高壓滅菌，4℃保存。
（4）3 M NaAc PH5.2，高壓滅菌，4℃保存。
（5）異丙醇，*（8 mg/ml），酚，無水乙醇，70%乙醇，LB培養(yǎng)基，電泳試劑。
 
二、其它elisa免疫檢測試劑盒操作步驟 
 
1.  細菌繁殖：LB培養(yǎng)基，2 ml/20ml，37℃，200 rpm，搖一搖，過夜。
 
2.  離心10 min，5 000 rpm， 4℃；棄上淸液。
 
3.  沉淀（菌體細胞）預(yù)冷的TES緩沖液洗滌，離心10 min，5 000 rpm， 4℃，加入預(yù)冷的1 ml Solution I，冰浴10 min。
 
4.  重新懸浮，加入150 ul*母液，室溫放置5 min。
 
5.  加入1.2 ml Solution II， 冰浴5 min。
 
6.  加入0.9 ml預(yù)冷乙酸鉀，混勻，離心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
7.  加入1.5 ml異丙醇，-20℃冰箱內(nèi)放置15 min。
 
8.  離心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
9.  取沉淀，懸于400 ul TE緩沖液中。
 
10.  加入40 ul，3 M NaAc。
 
11.  酚，抽提，乙醇沉淀。
 
12.  離心10 min，12 000 rpm，4℃。
 
13.  取沉淀，冷凍干燥，再懸浮于50 ul TE緩沖液中。
 
14.  電泳檢測提取DNA的質(zhì)量其它elisa免疫檢測試劑盒。