其它elisa免疫檢測試劑盒酶標記抗體法的染色步驟

  (一)其它elisa免疫檢測試劑盒直接法
    (1)石蠟切片脫蠟至水，冰凍切片或細胞涂片經丙酮固定10min，PBS洗3min×2次。
    (2)滴加0．3％Hz02甲醇液，室溫處理20min，PBS洗3min× 3次(抑制內源性過氧化物酶活性)。
    (3)0。l％*37~C消化20min或AR(只限于石蠟片)，PBS洗3min×3次。
    (4)滴加1：(5～20)正常羊血清或牛血清20min(室溫或37℃)，吸去多余血清，不洗。
    (5)適當稀釋的酶標記特異性抗體(一抗)孵育60min 37℃，PBS洗3min×3次。
    (6)0．04％DAB+0．03％Hz02顯色8—12rain，在光鏡下控制。
    (7）充分水洗，蘇木精復染，鹽酸乙醇分化15～30s。
    (8)常規樹膠封片，結果觀察。
 
    (二)間接法
    (1)～(3)同直接法。
    (4)第二抗體的正常動物血清1：20，室溫20min(阻斷非特異性結合位點)，傾去多余血清，不洗。
    (5)其它elisa免疫檢測試劑盒適當稀釋的特異性抗體(一抗)濕盒37℃中孵育60min，或室溫孵育4h，或4℃孵育過夜，PBS洗3min×3次。
    (6)酶標記抗體(二抗)37℃孵育40min，PBS洗3rain×3次
    (7)DAB／Hz02顯色8～12rain，鏡下控制。
    (8)以下同直接法。
 
    (三)三步酶標間接法
    三步酶標間接法是在酶標間接法的基礎上再加一步酶標記三抗，信號進一步放大，使敏感性進一步增加。第三步酶標記三抗必須是抗第二步酶標記二抗，例如第三步酶標記二抗是兔抗鼠，第三步酶標記三抗應該是羊抗兔酶標抗體。另外，第二步和第三步酶標抗體所用的酶必須是同一種酶。
 
    (四)酶標記抗原法
該方法僅用一種特異性抗體，抗體必須過量。其原理是抗體中二個抗原結合位點(二價)分別與組織細胞內的抗原和酶標記抗原結合。其它elisa免疫檢測試劑盒該法的Z大的優點是對抗體的特異性和純度要求不高，可以非常穩定地進行IHC的雙重標記，標記二種抗原。