細胞株測序的技術(shù)要求

對細胞株進行單個分離、研究、和比較有助于細胞異質(zhì)性和基因組不穩(wěn)定研究。Z常見的單細胞測序應(yīng)用是在腫瘤研究領(lǐng)域。哈佛大學終身教授、美國科學院院士謝曉亮教授是單細胞測序其中一種技術(shù)路線的人。

2015年謝教授課題組在單細胞全基因測序研究領(lǐng)域曾取得重要進展，利用“eWGA”擴增方法，大幅提高了擴增的均勻性和準確性，可同時檢測出單細胞中的小片段拷貝數(shù)變異和高精度的單核苷酸變異，該方法還具有基因組的高覆蓋率，有效降低外源污染。  

這是一項經(jīng)過改良的單細胞全基因組擴增（whole-genome amplification，WGA）方法，被稱為“通過轉(zhuǎn)座子插入的線性放大（Linear Amplification via Transposon Insertion，LIANTI）”。利用Tn5轉(zhuǎn)座子（含T7啟動子）隨機將DNA切碎，使得DNA樣本得以線性放大。

WGA是單細胞測序技術(shù)的關(guān)鍵。目前的WGA技術(shù)方法仍存在一些局限性，比如準確度、基因拷貝數(shù)空間分辨率、保真度都有待提高。

為了應(yīng)對這些問題，不僅需要從技術(shù)改進下手，謝教授課題組還提出了“構(gòu)建無偏見細胞基因組文庫（making an unbiased library）”的概念
研究還發(fā)現(xiàn)，細胞株基因組中所觀察到的主要的胞嘧啶到胸腺嘧啶（C-T）的突變，通常起因于人工進行的細胞裂解操作，這一操作導致了胞嘧啶的脫氨基作用。至于如何改善這種不可避免的誤差。研究人員提出可以通過與同類細胞的序列進行比較得以修正。本篇報道已鑒定出單個人類細胞的SNVs頻譜，揭示了SNVs在全基因組內(nèi)的非隨機分布。
250克    MHB    用于抗菌素藥物敏感性試驗    MH肉湯
250    Martin Broth ,Modified    用于菌苗及生物制品霉菌無菌檢驗    改良馬丁液體培養(yǎng)基   
250    BCYE Agar(Legionella Agar)    用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)(OXOID方法)    BCYE 瓊脂(Legionella 瓊脂)
0.5ml*20    Rabbit  Plasma    用于金黃色葡萄球菌凝固酶試驗    兔血漿  
250    Sodium lurite Broth Base    用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉1ml    亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)   
250    Beisachang Sodium lurite Broth Base    用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉0.2ml    北沙參亞碲酸鈉胨水培養(yǎng)基基礎(chǔ)
250    Broth Medium    用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)（SN標準）    普通肉湯培養(yǎng)基     
細胞株