如何讓ATCC細(xì)胞不分化

ATCC細(xì)胞為了保持hESC存活且具有多能性，研究人員通常在滋養(yǎng)層細(xì)胞(也就是一層小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)上培養(yǎng)，或者在微載體上成簇培養(yǎng)。但是在這些基質(zhì)上培養(yǎng)干細(xì)胞是相當(dāng)昂貴的，而且培養(yǎng)物不能在很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持未分化狀態(tài)，盡管所有必需的生長(zhǎng)因子都存在。

Reubinoff的研究團(tuán)隊(duì)正在研究hESC簇分化成神經(jīng)細(xì)胞，他們一直在使用invitrogen的Neurobasal培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基能夠在無(wú)滋養(yǎng)層的條件下長(zhǎng)時(shí)間維持神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和正常表型。在研究過(guò)程中，研究人員注意到并非所有細(xì)胞都分化了。他們懷疑是培養(yǎng)基的選擇導(dǎo)致了這種現(xiàn)象，于是他們開始集中精力研究培養(yǎng)基如何促進(jìn)干細(xì)胞生長(zhǎng)并抑制分化。

為了驗(yàn)證他們的理論，研究小組定制了培養(yǎng)基。他們?cè)贜eurobasal培養(yǎng)基中加入了血清替代物，還加入了干細(xì)胞生長(zhǎng)所需的蛋白，包括細(xì)胞外基質(zhì)組分、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2和活化素A。研究人員在常規(guī)的無(wú)血清培養(yǎng)基和定制培養(yǎng)基中培養(yǎng)了hESC。三個(gè)星期之后，定制培養(yǎng)基中存在更多的未分化hESC細(xì)胞。

使用這種新的培養(yǎng)基，研究小組檢驗(yàn)了三種不同的hESC系。他們利用熒光激活細(xì)胞分選(FACS)在7周和20周后分析了培養(yǎng)物，發(fā)現(xiàn)90%的細(xì)胞仍維持多能性。這項(xiàng)突破為在計(jì)算機(jī)化的自動(dòng)系統(tǒng)中大規(guī)模擴(kuò)增胚胎干細(xì)胞創(chuàng)造了可能性。此外，通過(guò)改變培養(yǎng)條件，還可能進(jìn)一步指導(dǎo)干細(xì)胞長(zhǎng)成特定的細(xì)胞類型，用于研究或病人的移植。

然而，研究小組也承認(rèn)，他們的方法并不。在細(xì)胞傳代過(guò)程中，他們丟失的ATCC細(xì)胞數(shù)是滋養(yǎng)層培養(yǎng)方法的近3倍。他們還將繼續(xù)完善這種技術(shù)，以確保培養(yǎng)產(chǎn)量盡可能地高。
進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)        120mm培養(yǎng)皿    100U
*    2～8℃    150mm培養(yǎng)皿    50毫克
*    2～8℃    培養(yǎng)皿刷    1KU
*    保存：-20℃    35mm玻底培養(yǎng)皿    1KU
進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)        96孔單條可拆酶標(biāo)板    5毫克
*    保存：-20℃    96孔不可拆酶標(biāo)板    1毫克 
*        0.5ml凍存管    5毫克 
*    2～8℃    1.2ml凍存管    500u
進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)        1.5ml凍存管    1.2KU
*    2～8℃    1.8ml外旋凍存管    250毫克
*        1.8ml內(nèi)旋凍存管    500U
*        2.0ml凍存管    2KU
進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    2～8℃    3.0ml凍存管    1克
*        4.5ml凍存管    5克
*    保存：-20℃    5.0ml凍存管    1克
ATCC細(xì)胞