ATCC細胞培養中死活細胞測定

ATCC細胞培養過程中需要測定細胞的存活率以了解細胞的生長狀態，鑒定細胞存活常用的方法有染色法和儀器分析法。染色法可直接通過細胞形態，區別細胞死亡，它是一種簡單的細胞存活鑒定方法。

【實驗原理】

(一)染色法是常用的細胞死活鑒定方法，簡便，易于操作。實驗是利用了死活細胞在生理機能和性質上的差異來進行的。死活細胞在生理機能和性質上的差異主要體現在：

(1)死活細胞細胞膜通透性的差異：活細胞的細胞膜是一種選擇性膜，對細胞起保護和屏障作用，只允許物質選擇性的通過;而細胞死亡之后，細胞膜受損，通透性增加。

(2)死活細胞在代謝上的差異：由于活細胞中新陳代謝的作用，使細胞內具有較強的還原能力，而死細胞或代謝緩慢的老細胞，則因它們的無還原能力或還原能力極弱。

常見的細胞染料有：中性紅(細胞器的專有染料)、臺盼藍、甲基藍、美藍、熒光素雙醋酸酯(FDA)等。

① 中性紅染色：常用染料之一，是細胞器的專有染料。利用細胞膜的通透性差異，用來染原生動物和顯示動植物組織中活細胞的內含物等。中性紅無毒，常做活體染色的染料。

② 臺盼藍染色：當細胞損傷或死亡時，臺盼藍可穿透變性的細胞膜，與解體的DNA 結合，使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以鑒別死細胞與活細胞。嚴格來說，臺盼藍染色檢測的是細胞膜的完整性，通常認為細胞膜喪失完整性，即可認為細胞已經死亡。通過顯微鏡很容易就能識別出死亡的被臺盼藍染色的細胞，并可使用細胞計數器進行計數。

③ 美藍染色法：美藍是一種無毒性染料，它的氧化型是藍色的，而還原型是無色的，用它來對活細胞進行染色，由于細胞中新陳代謝的作用，使細胞內具有較強的還原能力，能使美藍從藍色的氧化型變為無色的還原型，所以活細胞無色，而對于死細胞或代謝緩慢的老細胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，用美藍水浸片不僅可觀察酵母的形態，還可以區分死、活細胞.

④ 甲基藍染色法：甲基藍染色與臺盼藍類似的染色機理。

(二)植物細胞質壁分離法及活體染色測定細胞死活

(1)質壁分離法：成長的植物細胞一般具有中央液泡，在中央液泡和細胞壁之間為細胞質的薄層及其內外膜——液泡膜和質膜。液泡中的胞液具有一定的溶質勢(或稱滲透勢)，而活的原生質特別是液泡膜和質膜則具有半透性。所以，當細胞與外界溶液接觸時，便與外液構成滲透系統，并可能發生水分的移動。若外液的水勢低于胞液的溶質勢，則水分外滲的結果可使原生質隨著液泡一起收縮而脫離細胞壁，發生質壁分離，質壁分離的細胞與水或水勢較高的溶液接觸時，可重新吸水而是質壁分離復原。

(2)ATCC細胞活體染色法：活體染色是利用某種對植物無害的染料稀溶液對活細胞進行染色技術。中性紅是常用的染料之一，它是一種弱堿性pH6.4～8.0之間(由紅變黃)，在中性或微堿性環境中，植物的活細胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌，由于液泡在一般情況下呈酸性反應，因此，進入液泡的中性紅便解離出大量陽離子而呈現桃紅色。在這種情況下，原生質和細胞壁一般不著色。死細胞由于原生質變性凝固，胞液不能維持在液泡內，因此，用中性紅染色后，不產生液泡著色現象，相反，中性紅的陽離子卻與帶有一定負電荷的原生質及結合，而使原生質細胞核染色。
100754    DL-5-Hydroxytryptophan    129-15-7    carbamyl-B-methylcholine chloride*crystalline
100755    DL-5-羥基色氨酸    Vat Yellow GCN    Carbohydrazide
100756    114-03-4    還原黃GCN    Carbon disulfide
100757    Benzylpenicillin potassium    129-09-9    carbon monoxide,cyl. with 10 L (net~3kg)
100760    青霉素鉀    3-(A-acetonylbenzyl)-4-hydroxycoumarin    carbon tetrafluoride
100762    113-98-4    華法林鈉    Carboxymethylcellulose sodium
100763    chlorphenamine hydrogen maleate    129-06-6    Carboxymethylcellulose sodium
100764    馬來那敏    Pyrene    cephalotin sodium salt
ATCC細胞