ATCC細胞的分離技術-尼龍毛法

（一）ATCC細胞原理 
混合單個核細胞懸液在通過尼龍毛柱時，B細胞、漿細胞、單核細胞和一些輔助細胞被選擇性粘附于尼龍毛上，而多數T細胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細胞群的有效方法。

（二）材料及試劑
1．尼龍毛（ Nylon Wool Fiber）。
2．燒杯、鋁箔、漏斗、一次性手套等。
3．裝填尼龍毛柱，一次性注射器。
4．取自然沉降的上層血漿，過聚蔗糖—泛影葡胺分層液后，獲取的血漿和分層液之間的單個核細胞層。

（三）操作方法 
1．尼龍毛的清洗與干燥
（1）戴上已經洗去滑石粉的一次性手套，將尼龍毛（1包或2包，每包35g）放入燒杯中，加入蒸餾水或去離子水，用鋁箔蓋上燒杯并煮沸約10min。
（2）冷卻至常溫，倒入漏斗內，使水滴干。
（3）重復（1）、（2）步驟6次。
（4）將尼龍毛攤在鋪有紗布的方盤內，37℃溫箱干燥2～3天后，貯藏在帶蓋的方盤內。

2．裝尼龍毛柱
（1）取50ml玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器頭上套一段帶夾子的膠管。
（2）將尼龍毛梳理，并適當折疊，以適應注射器的直徑，填入注射器內，約20ml的體積。
（3）將填好尼龍毛的注射器連同注射器芯一起包好，高壓滅菌。

3．細胞分離
（1）將注射器固定在支架上，倒入37℃的細胞培養液，關閉閥門一定時間，然后打開閥門，放掉細胞培養液，以清洗幾次尼龍毛，關上閥門。
（2）將要分離的細胞液用預先加溫的培養液稀釋成適當的濃度，約5.00×107個細胞／ml。
（3）將細胞液倒入注射器內，使之沒過尼龍毛柱。蓋上注射器，37℃溫育45min
至1h。
（4）打開下口，緩慢放流（1滴／min），收集于離心管中。
（5）離心，即獲所需的T淋巴細胞。
（6）關閉注射器下口，于注射器內加入0.85％冰冷生理鹽水，振蕩，并套上注射器芯，打開下口，使勁推出注射器內液體，即獲得粘附于尼龍毛上的B淋巴細胞、漿細胞、巨噬細胞等。

（四）ATCC細胞注意事項
1．此種分離法，T淋巴細胞也常有一部分被吸附，吸附的多少與尼龍毛的質量有關，與裝柱的松緊也有關系。
2．此法的T淋巴細胞的回收率約20％～30％。
3．用過的尼龍毛可回收，以鹽水洗滌，然后浸入0.1Mol/L的HCl中過夜，然后再同前法清洗。
鹽酸水蘇堿    含量測定    對照品    20mg
鹽酸小檗堿    含量測定    對照品    30mg
黃芩苷    含量測定    對照品    40mg
靛藍    鑒別    對照品    30mg
靛玉紅    含量測定    對照品    30mg
酯蟾毒配基    含量測定    對照品    20mg
麝香酮    GC含量測定    對照品    0.15ml
橙皮苷    含量測定    對照品    20mg
柚皮苷    含量測定    對照品    20mg
甘草次酸    含量測定    對照品    20mg
ATCC細胞