破碎原代細胞的方法

破碎原代細胞是獲得細胞各個組分的*步，也是很關(guān)鍵步驟：破碎不充分，會影響細胞器產(chǎn)量；破碎過度，有時會破壞細胞器。破碎細胞一般是在低溫條件下，將細胞在等滲液中制備成細胞懸液，進行破碎細胞使之成為各種細胞器及其包含物的勻漿。

(一)勻漿法

勻漿(homogenization)是Z常用的破碎細胞的方法，一般都要在冰上操作。較為經(jīng)濟的方法是使用玻璃勻漿器。手動玻璃勻漿器由一根端部表面磨砂的玻璃桿和一個內(nèi)壁磨砂的玻璃套管組成。使用時，先用鋒利的刀片把組織塊切碎，然后把碎塊加入套管中，用力移動玻璃桿使組織細胞破碎。因為在研磨的過程中會摩擦產(chǎn)熱，引起蛋白變性，所以一般都在冰上操作，冰上操作還可以抑制細胞酶活性，防止降解。電動玻璃勻漿器和手動玻璃勻漿器原理和使用方法相似。

(二)高速組織搗碎機法

高速組織勻漿機有高速轉(zhuǎn)動的電機，可以帶動鋼制轉(zhuǎn)頭高速旋轉(zhuǎn)，從而剪切樣品、達到破碎細胞的目的，可以用于微量樣品的制備。使用時將待處理細胞懸于細胞裂解液中．加入到塑料離心管(因為刀頭速度過快，為防止碎裂，盡量避免使用玻璃試管)中，并放置于冰上，將組織勻漿機的探頭浸入離心管中，然后打開電源，緩慢調(diào)整旋轉(zhuǎn)速度，一般開機數(shù)十秒后．組織細胞即可被高速旋轉(zhuǎn)的探頭破碎。但不宜時間過長，以防高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生熱而導(dǎo)致分離物中的活性物降解。

(三)超聲波處理法

超聲波發(fā)生器能產(chǎn)生高強度的超聲信號，經(jīng)換能器傳送至與之接觸的溶液中，由聲波形成沖擊和振動而產(chǎn)生剪力，致使原代細胞破碎，一般體外培養(yǎng)的動物細胞均可在短時間內(nèi)破碎，因超聲時可產(chǎn)熱，應(yīng)注意冰浴冷卻，生物大分子如核酸和酶對超聲敏感，一般不宜采用。如果提取蛋白、多糖等，可采用超聲法降解核酸。超聲法可以和勻漿法相結(jié)合，即先通過勻漿的方法破碎細胞，再通過適當(dāng)?shù)某曔M一步裂解。

(四)化學(xué)裂解法

在細胞懸液中加入Titon X-100、NP-40、SDS、去氧膽酸鈉均可使細胞裂解，往往仍需機械法進行輔助，方可在短時間內(nèi)使細胞*裂解，裂解后應(yīng)清除化學(xué)裂解劑，以防止干擾分析。這些化學(xué)物質(zhì)往往配制成細胞裂解液。

(五)反復(fù)凍融法

可將細胞懸浮于細胞裂解液在一70℃或液氮中冷凍后，迅速于37℃融化，經(jīng)3—4個凍融周期．可使原代細胞破碎。如果結(jié)合超聲法，一般來說效果會更好。