ATCC細胞的凍存注意事項和簡便方法

ATCC細胞注意事項：

1.使用DMSO前，不需要進行高壓滅菌，它本身就有滅菌的作用。高壓滅菌反而會破華它的分子結構，以至于降低冷凍保護效果。在常溫下，DMSO對人體有害，故在配制時戴上手套操作。

2.不宜將凍存細胞放置在0℃～-60℃這一溫度范圍內(nèi)過久，低溫損傷主要發(fā)生在這一溫度區(qū)內(nèi)，是“危險溫區(qū)”。

3.注意定期檢查液氮罐內(nèi)液氮量，及時添加。

簡便方法：

胰蛋白酶液消化>>離心>>PBS液1ml洗滌，吹打制成待測ATCC細胞懸液>>取1ul懸液+9ulPBS>>細胞計數(shù)：

1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數(shù)槽上.

2.用10ul槍頭將細胞懸液注入計數(shù)板，要保證蓋片下充滿懸液，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。

3.統(tǒng)計四個大格的細胞數(shù)：將血球計數(shù)板放于顯微鏡的低倍鏡下觀察，并移動計數(shù)板，當看到鏡中出現(xiàn)計數(shù)方格后，數(shù)出四角的四個大鉻(每個大格含有16個中鉻)的細胞數(shù)目。

4.計算原細胞懸液的細胞數(shù):按照下面公式計算細胞密度：

(ATCC細胞懸液的細胞數(shù))/ml=(四個大格子細胞數(shù)/4)×106