血細(xì)胞的分離技術(shù)操作方法

（一）材料與試劑 
1．抗凝劑 
（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其鈉鹽或鉀鹽，它能阻止凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶，進(jìn)而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白，從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1 000U/ml，市售肝素多為100U~126U／mg。 
（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一種螯合劑。用鹽水配制成4％的溶液備用。 
（3）阿氏液（Alsever液），配方如下： 
枸櫞酸鈉（Na3C6H5O7·5H2O） 0.80g 枸櫞酸 0.0325g 葡萄糖 2.05g 
混勻溶解后，114.3℃高壓蒸汽滅菌10min備用。 
阿氏液中既含有枸櫞酸鈉抗凝劑，又含有細(xì)胞生存的營(yíng)養(yǎng)，所以它既可做抗凝劑，又可做血細(xì)胞的保存液。 
2．針頭 根據(jù)不同動(dòng)物和采血部位，采用不同型號(hào)的針頭，用前必須滅菌或消毒。 
3．采血容器 注射器或三角瓶等。 
4．采血?jiǎng)游铩?nbsp;

（二）操作方法 
1．采血法 各種動(dòng)物采血方法不一。馬、牛、羊等大動(dòng)物一般從頸靜脈采血，豬從頸靜脈、前腔靜脈或耳靜脈采血，家禽由翼下靜脈或心臟采血，兔由心臟或耳靜脈采血，犬由頸靜脈或四肢靜脈采血，豚鼠由心臟采血，小白鼠則可斷尾或剪斷腋下血管或剪斷眼球采血。 
2．抗凝 采集血液Z關(guān)鍵的問題是抗凝，采用什么方法進(jìn)行抗凝，則根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求和條件而定。Z常用的方法如下： 
（1）肝素抗凝：采血時(shí)，使每ml血液含15U~20U肝素即可。計(jì)算采集的血液量，按1 000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血時(shí)，邊采血邊輕輕搖動(dòng)，使抗凝劑和血液混勻。對(duì)于采少量的血液或小動(dòng)物采血，可直接用注射器抽取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。 
（2）EDTA抗凝：采血前，用滅菌鹽水將EDTA配制成4％溶液，然后按預(yù)采血液的量，以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液體量于采血容器內(nèi)。采血，并不斷搖動(dòng)采血容器，使之混勻。 
（3）玻璃珠法：預(yù)先將適量的玻璃珠（根據(jù)采血量多少而定）清洗后，裝入采血容器中，滅菌后備用。采血過程中，邊采邊搖采血瓶，以使小玻璃珠在血液中滾動(dòng)，以機(jī)械地除去纖維蛋白，使血液不能凝固。本法雖較麻煩，但對(duì)淋巴細(xì)胞的活性影響Z小，且可減少血小板的混雜。 
（4）阿氏液采血：以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液，邊采邊輕輕搖動(dòng)采血瓶，使之混勻。用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于紅細(xì)胞的保存。一般在4℃條件下，阿氏液中保存的紅細(xì)胞2周其活性和特性不變。