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    污染是ATCC細(xì)胞培養(yǎng)的大敵

    時間:2016/12/29閱讀:326
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    ATCC細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染不僅僅指微生物,而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對細(xì)胞生存有害或造成細(xì)胞不純的物質(zhì),包括生物和化學(xué)物質(zhì)。

    一、細(xì)菌污染

    細(xì)菌污染是實驗室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染,即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素(一般為預(yù)防劑量),也可能因為操作不慎而引起污染。Z常見的有革蘭氏陽性菌,如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中又以白色葡萄球菌較常見。

    培養(yǎng)ATCC細(xì)胞受細(xì)菌污染后,會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,pH改變。也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無多少改變,只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以,每天應(yīng)仔細(xì)觀察。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多、增粗,Z后變圓脫落死亡,造成試驗失敗和細(xì)胞株(系)丟失。

    二、支原體污染

    支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨立生活的Z小微生物,Z小直徑0.2μm,一般過濾除菌無法去除它,光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn),能在偏堿條件(pH7.6~8.0)下生存,對青霉素有抗藥性。多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間。電鏡下可見其有三層結(jié)構(gòu),無細(xì)胞壁,中央有電子密度大的密集顆粒或絲狀的中心囊。

    培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后,部分敏感細(xì)胞可見細(xì)胞生長增殖變慢,部分細(xì)胞變圓,從瓶壁脫落。但多數(shù)細(xì)胞污染后無明顯變化,或略有變化,若不及時處理,還會產(chǎn)生交叉污染。

    三、真菌污染

    真菌污染是ATCC細(xì)胞培養(yǎng)過程中Z常見的一種,尤其在霉雨季節(jié)進行細(xì)胞培養(yǎng)更易污染。Z常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。

    培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后,可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點,有的散在生長,培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁;倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中,有的呈鏈狀排列。念珠菌和酵母菌呈卵圓形散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間。個體細(xì)小,有增多趨勢。鏡下看時,要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈,以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆。真菌污染后,細(xì)胞生長變慢,但Z后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。

    四、非同種細(xì)胞污染

    由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開,操作不當(dāng),往往會使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。如“靈長類”細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)猴和鼠類細(xì)胞的混合物,ERK/KD細(xì)胞是從兔腎中分離出來的,而現(xiàn)在句卻認(rèn)為是HeLa細(xì)胞。目前,世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染,致使許多實驗宣告無效。

    五、病毒污染

    采用組織ATCC細(xì)胞培養(yǎng)法疫苗,如果沒有除去潛在病毒的組織培養(yǎng)物,會產(chǎn)生病毒污染。目前,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),但疫苗是不安全的。若二倍體細(xì)胞系有SV40或多發(fā)瘤病毒,B淋巴細(xì)胞含EB病毒,細(xì)胞和會發(fā)生變異、轉(zhuǎn)化,形成異倍體的細(xì)胞系。因此,潛在病毒是細(xì)胞大量和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。

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