乙醇脫氫酶（ADH）紫外分光光度法 返回列表頁(yè)

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。

商品屬性：

商品介紹：

測(cè)定意義

ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換，在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成，肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

測(cè)定原理：

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm處有吸收峰，而NAD+沒有；測(cè)定340nm 吸光度下降速率，來計(jì)算ADH活性。

自備儀器和用品：

研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml石英比色皿、可調(diào)式移液器和雙蒸水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

二甲基雙十八烷基氯化銨 97%2-苯基 98%Anti-MIP-3 Beta/ELC/CCL19/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬炎性蛋白3β 抗體IgG

N-乙基-N-(3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽 99%1,3-二(4-氨苯氧基)苯 98%Anti-MIP4/CCL18/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬炎癥蛋白4抗體IgG

十六烷基二甲基乙基 98%2-基吡 98%Anti-Midnolin isoform Protein 1/FITC  熒光素標(biāo)記中腦核仁蛋白1抗體IgG

N-乙基-N-（3-磺基）-3-鈉鹽 98%對(duì)苯甲酸叔丁酯 98%Anti-Midnolin isoform Protein 2/FITC  熒光素標(biāo)記中腦核仁蛋白2抗體IgG

N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽 99%3,5-二三氟甲苯 98%Anti-MIF /FITC  熒光素標(biāo)記巨噬移動(dòng)抑制因子抗體IgG

N-乙基-N-（3-磺基）苯鈉鹽 99%4-叔丁基環(huán)己 98%Anti-MITF/FITC  熒光素標(biāo)記小眼相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG

2-乙基己氧基 99%間三氟甲苯 99%Anti-Mitofilin/IMMT /FITC  熒光素標(biāo)記線粒體內(nèi)膜蛋白抗體IgG

固藍(lán)B 90%2-乙酰吡 98%Anti-MK(Midkine)  熒光素標(biāo)記中期因子/肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子抗體IgG

乙醇脫氫酶（ADH）紫外分光光度法聚乙二單 平均分子量1000雞可溶性間粘附分子1(sICAM-1)免疫試劑盒酰肽受體3抗體（脂氧素A4受體）MAPKAP Kinase 2  絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體

酐 98%雞可溶性E選擇素(sE-selectin)免疫試劑盒兜蛋白抗體MAPK4  絲裂原活化蛋白激4抗體

1,3- 98%雞抗人IgM antibody 免疫試劑盒脂肪堆積和肥胖相關(guān)蛋白抗體MAPK13/SAPK4/p38delta  絲裂原活化蛋白激13抗體

氫氧化 AR,90%雞抗人IgG antibody 免疫試劑盒核苷交換因子FARP2抗體MAPK11/p38Beta  絲裂原活化的蛋白激p38β抗體

結(jié)晶碳 CP,98%雞抗人IgA antibody 免疫試劑盒FK506結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白抗體（他克莫司相關(guān)蛋白）MAPK organizer 1/Morg1  絲裂原活化蛋白激組織蛋白1抗體

三鈉 97%雞抗Ⅲ(AT-Ⅲ)抗體免疫試劑盒成纖維生長(zhǎng)因子受體1原癌因伴侶蛋白抗體MAP-9  微管相關(guān)蛋白9抗體

丁二酐 AR,98%雞抗鏈球菌溶血素O(ASO)抗體(IgM)免疫試劑盒鈣粘蛋白家族成員7抗體MAP7D1/RPRC1  精氨/脯氨富含卷曲蛋白1抗體

丁二 AR,99.5%雞抗鏈球菌溶血素O(ASO)抗體(IgG)免疫試劑盒Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體MAP65/ASE 1  擬南芥MAP65蛋白抗體

氫氧化鈉 AR,96%雞抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒細(xì)絲蛋白A抗體MAP4K6/MINK1  絲裂原活化蛋白激MAP4K6抗體

氫氧化鈉 GR,97%,片狀雞巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)免疫試劑盒化細(xì)絲蛋白A抗體MAP4K4  絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體

三 AR,99.0%雞窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒化細(xì)絲蛋白A抗體MAP4K1  造血祖激1抗體

三 測(cè)序雞降鈣素(CT)免疫試劑盒DNA損傷修復(fù)因XRCC9抗體MAP4  微管相關(guān)蛋白4抗體

三 for HPLC, ≥99.5% (GC)雞堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)免疫試劑盒化細(xì)絲蛋白A抗體MAP3K9  絲裂原活化蛋白激3K9抗體

三 for LC-MS, ≥99.5%雞狀腺素(T4)免疫試劑盒化神經(jīng)膜抗體MAP3K8/TPL2  絲裂原活化蛋白激激8抗體

三酐（TFAH） 衍生級(jí) (for GC), ≥99.0% (GC)雞狀旁(PTH)免疫試劑盒化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體MAP3K7IP3  NFKB激活蛋白1抗體