大鼠髓過氧化物酶 Elisa Kit說明書 返回列表頁

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大鼠髓過氧化物酶 （MPO）Elisa KitRat MPO  ELISA Kit
大鼠髓過氧化物酶 Elisa Kit說明書髓過氧化物酶(MPO)是一種血色素蛋白(分子質量 118kDa)，含一對重鏈和輕鏈 ，它存于嗜中性多核細胞的嗜天青顆粒和巨嗜細胞中，其功能為將氯化物和過氧化氫轉變為次氯酸鹽。在炎癥狀態下，它被釋放入細胞外液進入循環，因此傳統認為是一種殺菌的酶，在人體的天然防御 、免疫功能方面起重要作用。此酶參與含低密度脂蛋白(1ow density li—poprotein，LDL)的脂類氧化。以鄰位二氨基苯胺鹽酸鹽為底物加過氧化氫可定量血中和組織中的酶活性。MPO能氧化低密度脂蛋白膽固醇(1ow density lipoprotein cholesterol，LD—LC)，從而有利于巨噬細胞攝取LDLC并轉變為泡沫細胞 ；氧化高密度脂蛋白(hi density lipoprotein，HDL)，使其失去正常的功能；另外，MPO激活金屬蛋白酶、使粥樣硬化斑塊表 面不穩定趨于破裂；同時 MPO還催化消耗 內皮衍生的一 氧化氮(nitric oxide，NO)，從而減少 NO的生物利用度，損害 N0的血管擴張和抗炎功能Is]。關于 MPO的測定方法有多 種，紫外分光光度比色法、流式細胞儀和免疫組織化學染色 法 用來檢測循環中和組織中多形核細胞的 MPO活性，而 近期出現的酶聯免疫的定量法可測定血液中MPO的濃度。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。

試劑配制:
1、大鼠髓過氧化物酶 Elisa Kit說明書酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
注意事項：
1加樣：
①大鼠髓過氧化物酶 Elisa Kit說明書實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”，因此盡量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法，在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次，或適當增加洗板的次數；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結果要在15-30 min內完成，定性測定用肉眼判讀試驗結果時，反應板應水平距離白色背景10-15 cm；定量測定時用酶標儀讀取結果，酶標儀不應置于陽光或強光照射下，需先預熱15-30 min再進行測試。
?現貨供應　S100鈣結合蛋白A6(S100A6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

現貨供應　S100鈣結合蛋白A6(S100A6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

現貨供應　S100鈣結合蛋白A7(S100A7)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

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現貨供應　S100鈣結合蛋白A8(S100A8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

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現貨供應　肌球蛋白重鏈4(MYH4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

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現貨供應　肌球蛋白重鏈6(MYH6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T

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現貨供應　血小板衍生生長因子AB(PDGFAB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)　規格：　48T/96T
大鼠髓過氧化物酶 Elisa Kit說明書Linoleic acid 亞油酸60-33-30.2ml

Glipizide 格列吡嗪29094-61-9100mg

蓋玻片 24×24mm100片盒

聚四乙烯磁力攪拌子C-10個個

Rosiglitazone 羅格列酮堿250mg瓶

PEG 20000 聚乙二醇 200005kg瓶

垂體促卵泡素（FSH）100u×5支盒

Hoechst 33342 染色液（1mg/ml）1ml×10支

Dexamethasone sodium phosphate 地塞米松磷酸鈉5g瓶

Hemicellulase 半纖維素酶15KU瓶

Ubenimex 烏美司58970-76-620mg

Tranilast 曲尼司特53902-12-8100mg

Tilmicosin 替米考星108050-54-0100mg

Troxerutin 曲克蘆丁7085-55-4100mg

Topotecan 拓撲替康123948-87-820mg

Cefoperazone 頭孢哌酮62893-19-0100mg

200ul袋裝吸頭1000支包

芬蘭彩色移液器5-50ul支
操作步驟：
1）大鼠髓過氧化物酶 Elisa Kit說明書運用前，將所有試劑充沛混勻。不要使液體發生很多的泡沫，防止加樣時參加很多的氣泡，發生加樣上的差錯。
2）依據待測樣品數量加上規范品的數量決議所需的板條數。每個規范品和空白孔主張做復孔。每個樣品依據自個的數量來定，能運用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后參加50ul于反響孔內。
3）參加稀釋好后的規范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內。當即參加50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，悄悄振動混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數添加一次。
5）每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，悄悄振動混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內液體，每孔加滿洗刷液，振動30秒，甩去洗刷液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷，洗刷次數添加一次。
7）每孔參加底物A、B各50ul，悄悄振動混勻，37℃溫育10分鐘。防止光照。
8）取出酶標板，敏捷參加50ul停止液，參加停止液后應當即測定成果。
9）在450nm波利益測定各孔的OD值。