網(wǎng)格蛋白重鏈抗體 返回列表頁(yè)

免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過(guò)程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過(guò)胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過(guò)消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
Apaf-1()  凋亡蛋白活性因子-1（N端）左旋肉堿8-溴喹啉histone H3-like protein  組蛋白H3樣蛋白（N端多肽）

Activated protein C  活化蛋白C矢車菊素-3-0-葡糖糖苷8-溴喹啉HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)  艾滋病病-1/人類免疫缺陷病1型(抗原)

Apelin  脂肪炎癥因子Apelin氯化矢車菊素焦磷酸銅四水合物HIV-1(human immunodeficiency virus type 1)  艾滋病病-1/人類免疫缺陷病1型(抗原)

Apelin receptor  Apelin receptor5-羥色胺酸（5-HTP）溴鄰三酚紅Measles virus protein(Pla2 derived measles virus hemagglutinin protein)  麻疹病紅血球凝集素蛋白多肽

APC/Adenomatous Polyposis Coli  腺瘤樣息肉亥茅酚苷溴鄰三酚紅Measles virus protein(Pla2 derived measles virus hemagglutinin protein)  麻疹病紅血球凝集素蛋白多肽

APEX1  多功能DNA修復(fù)酶異鼠李素-3-O-新橙皮苷LinezolidHMGB1 (High Mobility Group Box protein 1)  高遷移率族蛋白-1(抗原)

ATH III  凝血酶Ⅲ紫蓳靈; 紫堇靈堿唑來(lái)磷酸一水化合物HSL(hormone-sensitive lipase)  荷爾蒙敏感脂肪酸（抗原）

APG4B/AUTL1  細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白4B高麗槐素; 馬卡因唑來(lái)磷酸一水化合物HSP-27(Heat Shock Protein 27)  熱休克蛋白-27(抗原)

組織蛋白酶S7-氟吲哚Porcine β2-GP (Beta2 Glycoprotein) 檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞死亡誘導(dǎo)蛋白4-氯-4'-氟丁酮Porcine αMSH (Alpha-Melanocyte Stimulating Hormone) 檢測(cè)試劑盒

前列腺雄激素抑制信號(hào)蛋白14-氯-4'-氟丁酮Porcine P 9 (Caspase 9) 檢測(cè)試劑盒

磷酸化心肌肌鈣蛋白3-溴-2-甲基吡啶Porcine TTR (Transthyretin) 檢測(cè)試劑盒

脊髓灰質(zhì)炎受體相關(guān)蛋白13-溴-2-甲基吡啶Porcine CALU (Calumenin) 檢測(cè)試劑盒

19號(hào)染色體開放閱讀框73丁二酸單甲酯Porcine FGF4 (Fibroblast Growth Factor 4) 檢測(cè)試劑盒

整合素αMIegrin αM丁二酸單甲酯Porcine AST (Aspartate Aminotransferase) 檢測(cè)試劑盒

軸突蛋白4/少突膠質(zhì)細(xì)胞2,4′-二溴酮Porcine IGF-2 (Insulin Like Growth Factor 2) 檢測(cè)試劑盒
網(wǎng)格蛋白重鏈抗體沙漠類芽胞桿Rat IL-23 (Ierleukin 23)  Kit

居泉沙雷氏Rat IL-27 (Ierleukin 27)  Kit

薄黑孔R(shí)at IL-32 (Ierleukin 32)  Kit

釀酒酵母Rat IFABP/FABP2 (Iestinal Fatty Acid Binding Protein)  Kit

釀酒酵母Rat MUC2 (Mucin 2)  Kit

平菇Rat AR (Amphiregulin)  Kit

繩狀青霉Rat KIM-1 (Kidney Injury Molecule 1)  Kit

淺黃隱球酵母Rat LDH (Lactate Dehydrogenase)  Kit