Bcl-2 試劑盒

       Bcl-2 試劑盒

該試劑盒以 HRP 標記的鏈霉親和素復合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）為基礎，可用于檢測細胞、組織內的特異性 B 細胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)
抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的
B 細胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異
性結合，后加入 HRP-SA，形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA 復合
物，顯微鏡下觀察成像。 石蠟包埋組織切片免疫染色

實驗步驟（建議方案）： 
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度 
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr； 
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min； 
3.水化： 切片經下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min； 
4.抗原修復： 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫
度達到 98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復，
直接進入第 5 步封閉。 
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min； 
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜； 
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育
30 min； 
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min； 
12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37
℃濕盒中孵育 30 min； 
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）； 
14.顯色：應用 DAB 溶液（試劑 F）顯色； 
15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明； 

16.封片： 待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片； 
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。 

試劑盒所含試劑： 

試劑 A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（選用） 
試劑 B 2 瓶封閉緩沖液（封閉用） 10ml/瓶 
試劑 C （*分裝）已稀釋的即用型 bcl-2 一抗（2.5ml） 
試劑 D （*分裝）生物素化羊抗兔 IgG 1 支 
（濃度 1.5 mg/mL，稀釋比為 1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液 20ml 
試劑 E  HRP-SA 復合物 1 支（濃度 1 μM，稀釋比 1:50~1:200）100 μL 
試劑 F  DAB 顯色液 5ml 
用戶自備試劑： 
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4） 
三羥基氨基甲烷 1.21g 
 

加蒸餾水 800mL，濃鹽酸調 pH 值至 7.2~7.4，后定容至 1000mL 
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比） 
2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液） 
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液 
檸檬酸 0.38g 
檸檬酸三鈉 2.45g 
加蒸餾水 900mL，濃鹽酸調 pH 值至 6.0，后定容至 1000mL 
或：0.5M EDTA 修復液（pH8.0） 
EDTA·2H2O 186.1g 
檸檬酸三鈉 2.45g 
加蒸餾水 700mL，用 10mM NaOH 調 pH 值至 8.0，后定容至 1000Ml 
3. 緩沖甘油封固劑 10 mL 
4. Tween 20 5 mL 

石蠟包埋組織切片免疫染色

實驗步驟（建議方案）： 
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度 
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr； 
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min； 
3.水化： 切片經下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min； 
4.抗原修復： 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫
度達到 98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復，
直接進入第 5 步封閉。 
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min； 
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜； 
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育
30 min； 
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min； 
12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37
℃濕盒中孵育 30 min； 
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）； 
14.顯色：應用 DAB 溶液（試劑 F）顯色； 
15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明； 

16.封片： 待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片； 
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。 
注意事項： 
1. 修復后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導致
結晶或抗原封閉。 
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復使
用。 
3. 若試劑為微量濃縮液，用前應低速離心，將內蓋和管壁附著的溶液離到底部。 
4. 封片前一定要換用 TBS 充分洗滌，以便洗去組織上殘留的 Tween 20，否則會
影響結果觀察。 
5. 如須復染細胞核，則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封
片。