細胞傳代培養實驗原理及步驟

實驗原理:

傳代培養是組織培養常規保種方法之一。也是幾乎所有細胞生物學實驗的基礎。當細胞在培養瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶，細胞才能繼續生長。這一過程就叫傳代。傳代培養可獲得大量細胞供實驗所需。傳代要在嚴格的無菌條件下進行，每一步都需要認真仔細的無菌操作。

實驗步驟:

1.入無菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒雙手。

2.倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液置37℃下預熱。

3.超凈臺臺面應整潔，用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。

4.打開超凈臺的紫外燈照射臺面20min左右，關閉超凈臺的紫外燈，打開抽風機清潔空氣，除去臭氧。

5.點燃酒精燈;取出無菌試管，巴斯德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內。

6.將培養用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。

7.倒掉培養細胞的舊培養基。酌情可用2-3mLHanks液洗去殘留的舊培養基，或用少量yi酶涮洗一下。

8.每個大培養瓶加入1mLyi酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察，當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養瓶，使細胞脫離yi酶，然后將yi酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。

9.加入少量的含血清的新鮮培養基，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7~10mL/大瓶，3~5mL/小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉，以利于CO?氣體的進入，將培養瓶放回CO?培養箱。

10.對懸浮培養細胞，步驟7-9不做。可將細胞懸液進行離心去除舊培養基上清，加入新鮮培養基，然后分裝到各瓶中。