鼠源單抗四個不同發(fā)展階段

自從1986年第一個鼠源性單抗藥物問世，現(xiàn)在全球已有近百種單抗藥物上市。伴隨現(xiàn)代科技的發(fā)展，治療性抗體經(jīng)歷了鼠源性抗體，人鼠嵌合抗體，人源化單抗以及全人源化抗體等四個不同發(fā)展階段。

第一階段：鼠源單抗

雜交瘤技術(shù)是將小鼠脾臟中的B細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合后，得到的雜交細胞能夠分泌抗體和無限傳代。第一步使用選擇性培養(yǎng)基選出雜交瘤細胞；第二步選出能產(chǎn)生我們需要的抗原特異性抗體的雜交瘤細胞。但是鼠源單抗在使用過程中卻遇到以下問題：（1）人體把這些單抗藥當作異體蛋白，會產(chǎn)生免疫排斥，使單抗藥很快從病人體內(nèi)被清除掉，降低了它們應有的療效。（2）少數(shù)病例中，鼠源抗體會引起嚴重的過敏反應，甚至導致了個別病人的死亡。

第二階段：人鼠嵌合單抗

嵌合抗體（Chimeric  antibody）用人源的抗體產(chǎn)生基因的恒定區(qū)序列來代替小鼠相應的抗體基因的恒定區(qū)序列，大大的降低了鼠源抗體產(chǎn)生的免疫原性反應，抗體的恒定區(qū)都被置換成人的氨基酸序列。嵌合單抗蛋白約33%的氨基酸序列來自小鼠，其余67%為人源的。然后插入載體，轉(zhuǎn)染細胞生產(chǎn)抗體。

第三階段：人源化單抗

人源化抗體改造是將鼠源單抗可變區(qū)中6個CDR與人的相對保守的可變區(qū)框架區(qū)（FR）結(jié)合，基因重組之后表達出蛋白。人源化單抗中人源的序列占90%。人源化單抗顯然比嵌合單抗更有優(yōu)勢，引起免疫排斥或超敏的風險更低。

第四階段：全人源化抗體

全人源抗體就是指組成抗體的氨基酸序列全部來自人類。現(xiàn)在已經(jīng)有四種技術(shù)可以用于全人源抗體制備。

噬菌體展示技術(shù)：是目前發(fā)展較為成熟的單抗藥物制備技術(shù)，是將抗體基因序列插入到噬菌體外殼蛋白的結(jié)構(gòu)基因中，使抗體基因與外殼蛋白一起表達。

酵母展示技術(shù)：真核表達系統(tǒng)，可以提高抗體折疊的正確性及表達后修飾的三維結(jié)構(gòu)，進而提高細胞表面蛋白結(jié)合的親和力和穩(wěn)定性。

轉(zhuǎn)基因動物全人源化抗體：通過轉(zhuǎn)基因的手段把小鼠自身的抗體表達系統(tǒng)破壞掉，再引進人的抗體生成系統(tǒng)。這種轉(zhuǎn)基因小鼠針對某種抗原就可以直接產(chǎn)生全人源的抗體。不過，這種技術(shù)產(chǎn)生的抗體是在小鼠體內(nèi)成熟的，沒有經(jīng)過人體環(huán)境的免疫選擇，從本質(zhì)上來說屬于“鼠源化"人單抗，存在一定的安全隱患。

單個B細胞抗體制備技術(shù)：利用EB病毒在體外能感染正常的B細胞，使之變成無限傳代的淋巴細胞系的原理，制備分泌人單抗的雜交瘤細胞。一般有三個步驟：鑒定和分離單個B細胞、擴增和克隆抗體基因及表達、篩選和鑒定抗原特異性抗體。該技術(shù)保留了輕重鏈可變區(qū)的天然配對，具有基因多樣性好、效率高、所需細胞量少等優(yōu)勢，因此更多用來制備天然全人源單克隆抗體藥物。阿達木單抗（修美樂）作為上市的全人源抗體，自2002年第一次獲得FDA批準上市以來，已經(jīng)累計創(chuàng)造了1161億美元的銷售收入。